实习十六  血红蛋白测定

一、目的要求

(一)掌握血红蛋白测定的方法。

(二)熟记其正常值及其临床意义。

二、见习方法

(—)辅导教师讲解操作方法及示范。

(二)学生分组练习。

三、见习用具：

  白工作衣自备。

血红蛋白吸管、光度计、红细胞计算盘、盖玻片、稀释液、试管等由实验至准备。

四、见习内容

(一)吸血练习：

1、取抗凝血一大滴，置于玻片上。

2、用右手拇指及中指握持血红蛋白吸管带气囊端，练习以食指头灵活控制气囊。

3、吸血恰到所需之刻度处。如稍多少许，可用干棉球回吸调准，再将血液吹出。注意避免混入气泡。如用力过大，血液吸至气囊内，要重新洗涤吸管再行吸血。

4、吸管洗涤：以生理盐水洗涤吸洗数次，用后棉花球堵住吸管嘴反复按气囊吹干数次，即可继续使用。

5、以上步骤反练习至熟练掌握。

(二)血红蛋白测定

红蛋白  (Hemoglobin，简称Hb)测定

一、氰化高铁血红蛋白(HicN法)

原理

全血加HicN试剂，除Hbs外其它血红蛋白衍生物均能转化成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白。在分光光度计540nm处比色测定，根据标准读数和标本读数计算其浓度。

试剂

HicN标准液：(齐文氏)  商品试剂

操作

1、取血20μl加到5ml HicN试医学全在线剂中，充分混和，静置5分钟。

2、分光光度计(带宽应小于8nm)，波长540nm处，光戏(比色杯内径1.000cm，以HicN试剂或蒸馏水液为空白，测定吸光度(A)。

计算

血红蛋白(g/L)=测定管吸光度××251

=测定管吸光度×367.7

式中：

①64458是目前国际公认的血红蛋白平均分子量。

②44000是1965年国际血液学标准化委员会(ICSH)公布的血红蛋白摩尔吸光度。

③251是稀释倍数。

由于仪器的差异，性能不一，仍以采用HicN参考标准液绘制标准曲线的方法为妥，以血红蛋白参考值www.med126.com/yishi/为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制曲线，实际应用比较方便。

注意事项

1、血红蛋白转化液中，KCN为剧毒药品。

2、下列因素可引起血红蛋白假性增高：脂血症、血液浓缩、白细胞>30000/μl。重症黄疸、严重的血管内溶血等。