免 疫 诊 断

一、抗原或抗体的检测

（一)抗原抗体反应（血清学反应)的基本原理

物质基础：抗原决定基与抗体的抗原结合部位之间结构的互补。

1．反应的特异性：专一性

结合强度指标：

●亲和力（affinity)：抗体分子上一个抗原结合部位与相应抗原决定基之间的结合强度

●亲合力(avidity)：一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。

●结合强度影响因素：温度、酸碱度、离子浓度等

2. 反应的可见性：抗原抗体比例适当。图

（二)检测方法

1．凝集反应：细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合，在有电解质存在的情况下，形成肉眼可见的凝集团块。

（1)直接凝集：图

玻片法：定性测抗原 。

ABO血型鉴定、细菌鉴定

试管法：定量测抗体。肥达氏反应

（2)间接凝集：图，将可溶性抗原包被在载体颗粒（红细胞、乳胶等)表面，与相应抗体反应出现颗粒沉淀物

间接凝集：包被抗原。如Coombs test，抗球蛋白试验，库姆斯试验 。

反向间接凝集：包被抗体

间接凝集抑制实验：图妊娠乳胶试验

凝集（-)

尿液 + 抗HCG HCG-乳胶

（HCG？)

不凝集（+)

2．沉淀反应：血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物。半固体琼脂凝胶为介质。

（1)单向免疫扩散

方法和原理：图

抗原扩散、沉淀环的直径与抗原含量成正相关，标准曲线的制备。

应用：Ig和C3的定量测定。

（2)双向免疫扩散

方法和原理：图 抗原和抗体扩散。有两 种以上的抗原抗体系统，两孔间可出现多条沉淀线。

应用：抗原或抗体的定性或定量检测、抗原抗体系统组成、抗原相关性分析。

（3)对流免疫电泳

方法和原理：图。双扩+电泳

应用：AFP（甲胎蛋白)检测

（4)免疫电泳

方法和原理：图。电泳后双扩

应用：血清蛋白种类分析

（5)免疫比浊
原理：在一定量抗体中加入递增的抗原，用浊度计测量，绘制标准曲线，推算样品抗原含量。
应用：取代单扩测定Ig含量。

3．补体结合试验

原理：抗体与红细胞上的抗原结合，激活反应体系中的补体，引起红细 胞的溶解。

方法：

检测系统：已知抗体或抗原+待检抗原或抗体

指示系统：SRBC+抗SRBC

补体

不溶血（+)

检测系统和补体 温育 加指示系统

溶血（-)

4．免疫标记技术：

标记物：荧光素、酶、放射性核素

特点：敏感性高，定性、定位、定量。

（1)免疫荧光法：

标记物：异硫氰酸荧光素（FITC) 图

藻红蛋白（PE)

方法：直接法和间接法：图

应用：传染病诊断、测定CD分子、自身免疫病诊断

（2)酶免疫测定：辣根过氧化物酶（HRP)、碱性磷酸酶（AP)

酶免疫组化法：测定细胞表面或组织中的抗原

酶联免疫吸附试验（ELISA)：测定可溶性抗原/抗体。

ELISA原理：将已知抗原或抗体吸附于固相载体（聚苯乙烯微量反应板)表面，使抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤液将游离成分洗去。

方法：

●双抗体夹心法：检测抗原

●间接法：检测抗体 图

●竞争法：

●生物素-亲和素系统ELISA：

应用：检测病原体的抗原或抗体、微量蛋白、 细胞因子

（3)放射免疫测定法（RIA)：常用131I、125I标记，用于微量物质测定。

（4)免疫印迹 图

二、淋巴细胞的测定：

（一)数量测定：淋巴细胞分离技术

1、E花结实验：

2．免疫荧光法：

T细胞—CD3、CD4、CD8

B细胞—mIgD、mIgM

3．流式细胞术：

4、磁珠分离法：

（二)功能测定

1．淋巴细胞增殖或转化试验：

原理：有丝分裂原等非特异性刺激T、B细胞向

淋巴母细胞转化、增殖。

方法：

3H-TdR掺入法

MTT法

2．细胞毒试验：Tc NK

3．细胞因子检测：ELISA法

4．皮肤实验：诱导局部迟发型超敏反应

5．溶血空斑实验：检测B细胞的抗体产生功能 图