药理学实验的基本知识和技术
一、实验动物的捉拿、固定及给药方法
1.小白鼠:右手抓住鼠尾,放在台上或鼠笼盖铁丝网下,然后用左手拇指沿其背部向前抓住其颈部皮肤,并以左手的小指和掌部夹住其尾固定在手上。另一抓法是只用左手,先用食指和拇指抓住小鼠尾尖,后用手掌及小指夹住其尾巴,再以拇指及食指捉住其颈部皮肤。前一方法易学,另一方法稍难,但便于快速捉拿给药。
小鼠灌胃(ig)法:将小鼠固定后,右手持装有灌胃器的注射器,自口角外插入口腔,沿上颚插入食道。如遇阻力,可将注射器拔出再插,以免穿破食道或误入气管,造成动物死亡。灌胃容量一般为0.1—0.2ml/10g,不超过0.5ml/只。
小鼠皮下注射(sc)法:两人合作,一人一手抓住小白鼠头部皮肤,另一手抓住鼠尾。另一人注射药物。注射部位在背部皮下组织。如一人操作时,左手抓鼠尾,让鼠爬在铁丝笼上,右手将抽好药液的注射器针头插入背部皮下组织。如一人操作时,左手抓鼠尾,让鼠爬在铁丝笼上,右手将抽好的药液的注射器针头插入背部皮下将药注入。注射量不超过0.5ml/只。
小鼠腹腔注射(ip)法:左手持鼠,右手持注射器从下腹左或右侧(避开膀胱)朝头部方向刺入,宜先刺入皮下,经2—3mm再刺入腹腔,此时针头与腹壁的角度约45度。针尖插入不宜太深或太近上腹部,避免刺破内脏,注射量一般为0.1—0.25ml/只。
小鼠尾静脉注射法(iv):将小鼠置于固定器内,使其尾巴露出,用70%酒精擦尾部,或将鼠尾浸入50℃热水中。待尾部静脉扩张后,左手拉尾,右手进针。注射容量不超过0.5ml/只。
2.兔:用手抓起它脊背近后颈处皮肤,抓的面积越大其持重点越分散。如家兔肥大,应再以另一手托住它的臀部,将持重点承托于手上。
将兔作仰卧位,一手仍抓住颈部皮肤,另一手顺其腹部抚摸至膝关节,压住关节。另一人用绳带捆绑四肢,使兔腹部向上,固定在兔手术台上。头部则用兔头固定夹固定。
兔灌胃法:二人合作,一人固定家兔于两膝之间,一手固定兔头,使头部后仰,另一手将开口器插入兔口,并向后翻转数次,使兔舌伸直并压在开口器下面。另一人将胃管从开口器中央孔也插入口内缓慢插入食道和胃。插管时感觉顺利,动物不挣扎,也不屏气,表示胃管在胃内,为慎重起见,将胃管外端放入水中,当兔呼气时,未见气泡出现,即证实胃管在胃内,然后将药液缓缓经胃管注入。灌胃容量一般为10ml/kg。
兔耳静脉注射法:两人合作,一人固定兔身及兔头,一人将兔耳后缘之毛拔去,显露耳缘静脉,用手指轻弹耳壳,使血管扩张。助手左手指压住耳缘静脉根部,待血管明显充血后,将抽好药液的注射器从静脉近耳尖处插入血管。针头刺入血管以后,以左手拇指和食指将针头与兔耳固定,不让针头滑动。放开耳根静脉手指压力,即可注入药液,若针头确实在血管内,则推药通畅无阻力,并见血液被药液冲走,如沆入皮下则耳壳肿胀、推注不顺,需拔出重新注射。注射守毕,用手指按在针眼上,然后将针尖抽出,并继续用手指或加棉球轻轻按压2—3分钟,以防出血,注射量0.5—2.5ml/kg。
3.大白鼠:以左手或持夹子抓住鼠尾,左手戴防护手套或用厚布盖住鼠身作防护,握住其整个身体,并固定其头骨,防止被咬伤,注意不要握力过大,勿捏其颈部以免窒息致死,根据实验需要可指定于大鼠固定笼内或用绳绑其四肢,固定于大鼠手术台上。
大白鼠灌胃、腹腔注射、静脉注射均可一人操作,基本方法与小鼠相似。也可将大鼠腹股沟切开,从股静脉注射药物,也可从外颈静脉插管给药(麻醉后)。
二、药理实验设计的基本原则
重复:重复的医学招聘网目的是看实验结果的重现率,重现率越高,实验的可信性就越好。重现率在95%以上者,可认为实验相当可靠,两药平均值或效率的差别有显著意义,并用“P(机率)<0.05”来表示,意即指:“不能重现的可能性小于5%”,如重现率在99%以上者可信为实验非常可靠,可做出“差别有非常显著意义”的结论并用“P<0.01”来表示;重现率小于95%者,说明重复同样实验100次,将有5次以上机会出现相反的结果,固此认为两药的差别可能是个体差异而造成的,统计学上可做出“两组差别并无统计学意义”的结论,并以P>0.05来表示。但这种结论并不意味着两组无差别。一般可在检查原因后,改进实验条件,增加实验例数,还有可能提高实验的重现率,达到统计学上有显著意义的水平。实验结果的实际价值,不但需从统计结论来看,还应从专业角度来看。在统计学上都是达到P<0.05的水平,实验例数多者并不一定比例数少者更有价值。但为了作出正确的结论,根据实验设计中的重复原则,对各类动物的重复数,可提出一个大体范围,以供实验设计参考。
2.对照:对照是比较的基础,没有比较就没有鉴别,也就谈不上科学性。对照应符合“齐同可比”原则,除了所研究的因素(药物)外,其他条件各组也应一律“齐同”。如动物的性别、年龄、体重。一般健康状况等,也应基本一致,只有这样才能具备“可比性”。所以实验设计必须设立对照组。对照组的类型有以下三种:
(1)阴性对照:包括①空白对照,即不给任何处理的正常动物作对照,较少用。②假处理对照,即除不用被研究的药物外,对照组的动物重经受同样的处理,如麻醉、手术、注射不含药物的溶媒等。这种对照的可比性好,较常用。
(2)阳性对照:包括①标准品对照,即以典型药物划标准品作为对照,以便评定药物的作用强度。②弱阳性对照,即以药效较弱的老药作为对照。如果新药优于老药,并有显著意义,则可肯定新药的价值。
3.随机:随机就是使每一个体在实验中都有同等的机会,随机遇而分组或接受处理。随机可减少许多难以控制的干扰因素,消除偏差。
药理实验常用符号
度量衡及剂量符号
L(l),升 | dl, 分升(10-1L) |
ml,毫升(10-3L) | μl,, 微升(10-6L) |
kg,千克(公斤) | g, dq (10-3kg) |
mg,毫克(10-3g) | μg,, 微克(10-6g) |
ng,纳克(10-9g) | pg, 皮克(10-12g) |
mol,摩尔 | mmol, 毫摩尔(10-3mol) |
nmol,纳摩尔(10-9 mol) | μmol, 微摩尔(10-6mol) |
cm ,厘米10-2m | m, 米 |
μm , 微米(10-6m) | mm, 纳米(10-3m) |
mmHg, 毫米汞柱 | nm, 纳米(10-医.学全在线9m) |
Pa,帕(1mmHg=133.3Pa) | MmH2O,毫米水柱 |
LD,致死量 | Kpa,千帕 |
MLD,最小致死量 | LD50,半数致死量 |
MED,最小有效量 | ED50,半数有数量 |
IU,iu,国际单位 | U,u,单位 |
M,克分子 | Ppm, 百万分之一 |
mEq, 毫克当量 | N,当量 |
用 药 途 径 符 号
id(ID)皮内注射 | SC(iH),皮下注射 | ip(IP),腹腔注射 | im(IM),肌肉注射 |
iv(IV)静脉注射 | Iv(IVgtt),静脉滴注 | po(PO),口服,经口 | ig(IG)灌胃 |
其 他
♂,雄性 | ♀雌性 | X,均数 | SD,标准差 | SE,标准误 | ±,加或减 |
>,大于 | <,小于 | Bp,血压 | ECG,心电图 | OD,光亮度 | |
wt,体重 | vol,容量 |