本方法采用高效液相色谱法测定酚咖片中对乙酰氨基酚（C₈H₉NO₂)与咖啡因（C₈H₁₀N₄O₂)的含量。

本方法适用酚咖片。

将供试品精密加入内标溶液，加流动相适量溶解并定量稀释。摇匀，过滤，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长275nm处检测对乙酰氨基酚与咖啡因和内标苯甲酸的吸收值，计算出其含量。

1. 甲醇

2. 冰醋酸

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，对乙酰氨基酚与咖啡因峰与内标峰的分离度应符合要求。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 水 冰醋酸= 28 69 3

2.2 检测波长：275nm

2.3 柱温：室温

1. 称取供试品

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚0.25g)，置100mL量瓶中。

2. 对照品溶液的制备

精密称取对乙酰氨基酚对照品与咖啡因对照品适量，置同一量瓶中，加甲醇-冰醋酸（95:5)溶解并定量稀释制成每1mL含2.5mg与0.3mg的溶液，摇匀，精密量取续滤液2mL置50mL量瓶中，加内标溶液5mL，加甲醇-冰醋酸（95:5)稀释至刻度，摇匀，即得。

3. 内标溶液的制备

取苯甲酸适量，加甲醇稀释制成每1mL含3.5mg的溶液，即得。

4. 供试品溶液的制备

上述供试品加入甲醇-冰醋酸（95:5)约75mL，振摇30分钟使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL置50mL量瓶中，加内标溶液5mL，加甲醇-冰醋酸（95:5)稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液10μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长275nm处测定对乙酰氨基酚与咖啡因及内标苯甲酸的吸收值，按内标法以峰面积分别计算对乙酰氨基酚与咖啡因的含量，即得。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.651。