2017年执业中药师中药化学章节考点(9)
第六章 黄 酮
第三节 提取与分离
一、提取
黄酮苷类以及极性稍大的苷元(如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查耳酮等)，一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。其中用得最多的是甲醇-水(1：1)或甲醇。一些多糖苷类则可以用沸水提取。在提取花青素类化合物时，可加入少量酸(如0.1%盐酸)。但提取一般黄酮苷类成分时，则应当慎用，以免发生酸水解反应。为了避免在提取过程中黄酮苷类发生水解，也可按常规提取苷的方法事先破坏酶的活性。大多数黄酮苷元宜用极性较小的溶剂，如用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等提取，而对多甲氧基黄酮的游离苷元，甚至可用苯进行提取。
对得到的粗提取物可进行精制处理，常用的方法有：
(一)溶剂萃取法
根据黄酮类化合物极性的大小分别萃取。一般的黄酮苷元可以选择氯仿或者乙醚进行萃取，单糖苷可以选择乙酸乙酯进行萃取，多糖苷可以选择水饱和的正丁醇来萃取。
(二)碱提取酸沉淀法
碱提取酸沉淀法对有酸性的游离的黄酮苷元都是合适的，因为游离的黄酮苷元具有亲脂性，由于有酚羟基显酸性，因此可以溶解在碱水中，当用碱水提取后，再加入酸，能够恢复为原来的游离的状态，具有亲脂性，在酸水中不溶解而形成沉淀。
黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄芩苷的提取都采用了这个方法。
在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热时破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成 盐，导致析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。当药材中含有大量果胶、黏液等水溶性杂质时(如花、果类药材)，宜用石灰乳或石灰水代替其他碱性水溶液进行提取，以使上述含羧基的杂质生成钙盐沉淀，不被溶出。这将有利于黄酮类化合物的纯化处理。
(三)炭粉吸附法
主要适于黄酮苷类的精制，大部分黄酮苷类可用7%酚-水洗下。洗脱液经减压蒸发浓缩后，再用乙醚振摇除去残留的酚，余下水层减压浓缩即得较纯的黄酮苷类成分。
二、分离
(一)柱色谱法
分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺、葡聚糖凝胶及纤维素粉等。
1.硅胶柱色谱
此法应用范围最广，按照黄酮类化合物极性的大小先后洗脱，达到分离的目的。主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化(或乙醚化)的黄酮及黄酮醇类。
2.聚酰胺柱色谱
对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小医学全.在.线.提供. www.med126.com。聚酰胺柱色谱可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括苷及苷元、查耳酮与二氢黄酮等。黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时有下述规律：
(1)苷元相同，洗脱先后顺序一般是：叁糖苷，双糖苷，单糖苷，苷元。
(2)母核上增加羟基，洗脱速度即相应减慢。
(3)不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮，二氢黄酮醇，黄酮，黄酮醇。
(4)分子中芳香核、共轭双键多者易被吸附，故查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。
3.葡聚糖凝胶(Sephadex gel)柱色谱
对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的凝胶：Sephadex-G型及Sephadex-LH20型。用葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是：
分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目，数目越多，越难洗脱。但分离黄酮苷时，则分子筛的性质起主导作用。在洗脱时，黄酮苷类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体。
(二)pH梯度萃取法
pH梯度萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂(如乙醚)后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH及4%NaOH溶液萃取，来达到分离的目的。一般规律大致如下：
7,4′-二羟基酸性最强，可以溶于5%NaHCO3，其次是含有7或4′-羟基可以溶于5%Na2CO3，然后是含有一般酚羟基可以溶于0.2%NaOH溶液中，最后是含有5-羟基只能溶解在4%NaOH溶液中。
(三) 根据分子中某些特定官能团进行分离
在黄酮类成分的混合物中，具有邻二酚羟基的成分与无此结构的成分，性质不同，可以进行分离。
1.铅盐沉淀法
有邻二酚羟基的成分可被乙酸铅沉淀，不具有邻二酚羟基的成分可被碱式乙酸铅沉淀，据此可将两类成分分离。
2.硼酸络合法
具有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此也可与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离。
