第十章  泌尿系统

第一节  尿液生成的影响因素及药物

   ［实验目的］

观察某些因素对尿生成的影响，并分析其作用机制。

   ［实验动物］

家兔，性别不拘。

   ［药品、器材］

1．器材

哺乳类手术器械、绳、线、纱布、动脉插管，生物信号采集处理仪、兔台、电剌激器、保护电极，培养皿、500ml烧杯、输液瓶、可控输液管和头皮针、膀胱插管、1ml、5ml、10ml、20ml、50ml注射器，酒精灯、温度计、火柴、三角支架、长柄木试管夹、血糖计、计时钟、10ml刻度试管和50ml量筒。

2.药品

 3%戊巴比妥钠125单位/ml肝素生理盐水、生理盐水、20%葡萄糖溶液,1：10 000去甲肾上腺素、垂体后叶素(含ADH)、速尿、班氏试剂(或尿糖试纸)。

[观察指示]

血压、血糖、尿糖、尿量。

   ［方法、步骤］

1．3%戊巴比妥钠30mg/kg体重，经耳缘静脉注射，麻醉后，背位固定于兔台上。

2．将输液针管内气泡排净，并经耳缘静脉输生理盐水溶液的基础液，固定输液速度(不超过每分钟10滴)，用止血钳或动脉夹固定头皮针，以防滑脱。

3．行左颈总动脉插管术  方法参见第五章第五节。用生物信号采集处理仪记录血压。分离、标记颈右侧迷走神经。

4．行膀胱插管术，从耻骨联合向上沿正中线作4～5cm长的切口，沿腹白线打开腹腔，将膀胱轻轻拉出腹外，于双侧输尿管(靠近膀胱处)下方穿一线，轻轻将膀胱向上翻起，将线绕向下方结扎，以防尿液从尿道口流出；用两个止血钳对称提起膀胱顶部的无血管区，在两钳之间的膀胱顶部无血管处剪一小切口，切口大小以刚插入插管为宜，在确认插管经切口已通向膀胱腔内时，再插入插管约0.5cm深，然后将切口旁的膀胱壁和插管一同用双粗线扎紧，用线固定在插管侧钩上。

    5.观察、记录实验结果

(1)记录术后尿量(ml/min)、血压(mmHg)，以作为下一项目的对照。

(2)  快速静脉注射37℃生理盐水20ml后，分别记录血压和第1、第2、第3分钟内的尿量。

(3)  以适宜强度、16HZ的脉冲电流剌激右迷走神经使血压下降至50mmHg时，并持续15秒钟，注意在血压刚下降时立即记录血压和第一分种内尿量。

(4)  在做此项前可加测血糖浓度(mg/dl)和做尿糖定性实验，静脉www.med126.com/Article/注射20%葡萄粮溶液5ml后，分别记录血压、血糖浓度第1，第2，第3分钟的尿量。并可做尿糖定性实验。

(5)  静脉注射1：10000去甲肾上腺素0.5ml后，记录血压和有血压升高时的尿量变化。

(6)  静脉注射速尿(5mg/kg体重)后，分别记录血压和第1、第2、第3、第4、第5和第6分钟内尿量。

(7)  静脉注射垂体后叶素2单位后，立即记录血压和第1分钟内的尿量。

(8)  经股动脉快速放血使动脉血压降至50mmHg时，立即止血并记录尿量变化，然后快速静脉输液使血压回升并记录血压和尿量变化。

附：尿糖定性试验：

①试管内加班氏试剂1ml，再加尿液2滴，在酒精灯上加热至煮沸，冷却观察试液及沉淀物，如试液由蓝色转为黄色或粉红色，表示尿糖试验阳性。

②也可用尿糖试纸做本实验。

实验完毕后将每个项目中的血压和尿量的实验结果填入表1-1中，并分析其机制。

表10-1  某些因素对兔尿生成的影响

［注意事项］

    (1)  膀胱插管过程中，动作应轻柔，以免膀胱充血、出血。

(2)  经静脉给药前，针管内的空气务必排干净。

(3)  每个观察项目均应有对照。

   ［思考题］

常见的影响尿生成的因素有哪些?机制是什么?

第二节  急性中毒性肾功能不全

   ［实验目的］

(1)  复制中毒性肾功能不全的动物模型

(2)  观察升汞中毒家兔的一般状况，肾功能的变化以及肾脏的形态改变。

   ［实验动物］

家兔，性别不拘。

   ［药品、器材］

1%HgCl2溶液，0.9%NaCl溶液，25%葡萄糖溶液，1%普鲁卡因溶液，标准尿素氮溶液(0.025mg/ml)，尿素标准应用液Ⅱ，二乙酰一肟一氨硫脲(DAM-TSC)液，酸混合液，5%醋酸溶液，蒸镏水。

兔手术器械一套，离心机、光电比色计、水浴锅、微量移液器，10ml试管、试管架、试管夹、酒精灯、塑料插管、膀胱插管，吸管、滴管、烧杯、培养皿、洗耳球，2ml、5ml、50ml注射器。

   ［观察指标］

(1)动物一般状况  (2)尿量  (3)尿蛋白  (4)血清尿素氮  (5)肾脏形态

   ［方法、步骤］

(1)家兔三只，一只为汞中毒兔，第二只为汞中毒加治疗兔，第三只为正常对照兔，汞中毒兔于实验前24小时称重，1%HgCl2肌肉注射(1毫升/公斤体重)，复制急性中毒性肾功能不全模型备用，对照兔则肌肉注射等量生理盐水。

(2)将家兔背位固定于兔手术台上，颈部剪毛，局麻，常规颈部手术，分离一侧颈总动脉并插管，取血5毫升作血清尿素氮测定。

(3)下腹部剪毛，局麻，暴露膀胱，(见第一节)用5ml注射器从膀胱内抽取尿液5ml置于试管内，做尿蛋白定性试验。

(4)行膀胱插管术(见第一节)，收集尿液测定尿量。

(5)经耳缘静脉快速注射37℃生理盐水(10ml/kg)，同时静脉注射速尿(5mg/kg)，分别记录注射后5、10、20、30分钟尿量。

(6)上述操作完毕后，静脉注射空气处死动物，打开腹腔，取出肾脏，观察肾脏外观及切面形态学改变。

尿蛋白定性检查：取正常及中毒兔尿液各3ml分别放入试管中，以试管夹夹住试管，在酒清灯上加热至沸腾(试管口不要对着人，小心加热，切勿让试管内尿液溢出)。若有混浊，加入5%醋酸3～5滴，再煮沸，若尿变清，是尿内无机盐所致，若混浊加重，则表示尿中含有蛋白，根据混浊程度可按下面标准判定结果。

“一”表示尿液清晰不显混浊。

“+”表示尿液出现轻度白色混浊(含蛋白质0.01～0.05克%)。

“++”表示尿液稀薄乳样混浊(含蛋白质0.05～0.2克%)。

“+++”表示尿液乳浊或有少量絮片存在(含蛋白质0.2～0.5克%)。

“++++”表示尿液出现絮状混浊(含蛋白质＞0.5克%)。

8.血清尿素氮测定

(1)原理：血中尿素在强酸条件下与二乙酰脲(Diacotylmonoxim)和氨硫住院医师脲(Thio-Semi-carbazixe)一起煮沸，生成红色复合物，其颜色深浅与尿素氮含量成正比关系。

(2)从正常及中毒家兔颈总动脉取血5ml，离心5分钟(2000转/分)。分离血清，用滴管将血清吸出，分别移入干燥小试管中备用。

(3) 尿素氮操作方法

  表10-2操作方法：

(测定管A为正常家兔血清，测定管B为中毒家兔血清)。

混匀后，置沸水锅中准确煮沸10分钟，置流水中冷却3分钟后比色，用520nm波长绿色滤光板比色，以空白管调零。

(4)计算：

测定管光密度(Du)  100 Du

标准管光密度(Ds)×0.002×0.02=Ds×10=血清尿素氮(毫克%)

   ［注意事项］

(1)加血清、标准液等试剂量应准确。

(2)加入试剂Ⅱ之后，不超过1～2分钟，即应放入沸水中水浴。

(3)煮沸及冷却时间应准确，否则颜色反应消退。

9．试剂的配制：

(1)二乙酰—肟氨硫脲液：

称取二乙酰—肟600毫克，氨硫脲30毫克，蒸馏水溶解并加至100毫升。

(2)酸混合液：

浓磷酸(85～87%)35ml，浓硫酸80毫升，慢慢滴加于800毫升水中，冷却后加水至1000毫升。

(3)尿素氮标准贮存液(1毫克氮/毫升)

称取分析纯尿素2.143克，加0.01当量硫酸溶解，并加至1000毫升，置冰箱内保存。

(4)尿素标准应用液Ⅰ(0.025毫克氮/毫升)。

吸取尿素氮标准贮存液2.5毫升，加0.01当量硫酸至100毫升。

(5)尿素氮标准应用液Ⅱ(0.005毫克氮/毫升)。

吸取尿素氮标准应用液Ⅰ120毫升，加0.01当量硫酸至100毫升。

   ［思考题］

根据实验结果阐述急性中毒性肾病的机能代谢变化及其机制。

第三节  肾脏功能状态对药物效应的影响

   ［实验目的］

观察肾脏功能损害对药物效应的影响。

   ［实验动物］

小鼠4只

   ［药品、器材］

0.04％氯化汞溶液、2.5％硫酸链霉素溶液、普通天平、注射器、鼠笼、针头与苦味酸等

   ［观察指标］

小鼠呼吸及肌肉活动情况，最后结果。

   ［方法、步骤］

(1)将小鼠编号并称重。

(2)在实验前24h先取小鼠2只，腹腔注射0.04％氯化汞溶液0.2m1／10 g体重，以破坏肾功能。

(3)实验当天取注射过氯化汞的小鼠和正常小鼠各2只，称重后分别由腹腔注射2.5％硫酸链霉素0.15ml／10 g体重（375mg/kg体重)，观察小鼠的活动情况，比较注射过氯化汞的小鼠与正常小鼠的最后结果有何不同。

将实验结果填入表10-3中。

 表10-3 不同肾脏功能状态对链霉素效应的影响

   ［思考题］

各鼠的最后实验结果有哪些不同?试对两组小鼠对药物反应不同的原因作简要的分析和讨论。