水禽衣原体病的确诊方法有哪些?
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(1)病料采集采集刚死亡禽新鲜的肝、脾、心肌以及胸腔、腹腔和
心包腔中的分泌物等病料。(2)染色镜检将肝、脾、心肌等做触片,或将胸腹腔等分泌物做涂片,用姬姆萨染色镜检,衣原体呈紫色。(3)病原分离将上述病料磨细用灭菌生理盐水做1:5—1:10稀释悬液,适量加入抗生素如
链霉素,或卡那霉素,或
万古霉素,每毫升1000~2 000单位,但不能加
青霉素。置4℃冰箱过夜,经l000转/分,离心10~15分钟,取中间清液作为病原分离材料。①鸡胚接种接种用的鸡胚要求来源于不饲喂抗生素,尤其是
四环素类、青霉素以及无
衣原体感染鸡群。胚龄为6~8日龄,卵黄囊接种,每枚0.1~0.2毫升。置37~38℃继续孵育8~10天。72小时内死亡弁去,对以后死亡鸡胚逐个取卵黄囊膜压片染色检查有无衣原体。阳性的卵黄囊膜经细菌检查阴性者作鸡胚传代或供其他试验用。如第一代未发现衣原体,应再
盲传2~3代检查。鸡胚多于接种后5~6天死亡,卵黄膜充血,绒尿膜
水肿。②小白鼠接种15克左右小白鼠腹腔接种。腹腔内
腹水大增,并集聚大量纤维蛋闩性渗出物,使腹部膨大,不能行走而死亡。脾脏肿大,是检验、保存、传代农原体的首选器官。也可用脑内和鼻内接种。此外,也可用豚鼠接种。③细胞接种 许多细胞株如Vero、BHK21、Hela229、BGM、MoCoy等以及鸡胚继代细胞内复制。本病原体能在鸡胚细胞产生蚀斑。在接种后3天,有60%-70%细胞受感染,即可用染色检查到衣原体。④血清学检查用补体结合试验方法检查发病初期和康复期抗体滴度,当抗体滴度增加4倍,即可判阳性。此外,也可用酶联免疫吸附试验、琼脂双扩交叉试验、间接血凝试验等方法。
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实验室检测诊断
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实验室检测