第二章 血液一般检验
第三章 血栓与止血一般检验
第四章 尿液检验
葡萄糖定性检查"style="color:#FF0000" >实验五 尿葡萄糖定性检查
第四章 脑脊液检验
第六章 生殖系统分泌物检验
一、毛细血管采血法
[目的]掌握毛细胞血管采血法，了解不同部位采血对检验结果的影响。
[原理]采血针刺破毛细血管后血液自然流出，用微量吸管吸取一定量的血液。
[器材]一次性消毒采血针、20ul吸管、75%乙醇棉球、无菌干棉球。
[试剂]洗涤液3管、生理盐水。
[标本]外周血
[操作]
1、准备 取试管1支，加入2ml生理盐水。取微量吸管和乳胶吸头相连，检查连接是否漏气，或取一次性微量吸管备用。
2、按摩 轻轻按摩左手中指或无名指指尖内侧，使局部组织自然充血。
3、消毒 用75%乙醇棉球擦拭采血部位皮肤，待干。
4、针刺 用左手拇指和示指固定采血部位使其皮肤和皮下组织绷紧，左手持一次性消毒采血针自指尖腹内侧迅速刺入，深度2～3mm，立即出针。
5、拭血 待血液自然流出后，用无菌干棉球擦去第1滴血。
6、吸血 血液自然流出时，用一次性微量吸管吸血到10ul刻度，然后用无菌干棉球压住伤口止血。如血流不畅，可以用左手自采血部位远端向指尖稍施压使血液流出。
7、稀释 用无菌干棉球擦净微量吸管外部后，将吸管伸入装有生理盐水的试管底部，慢慢排出吸管内的血液，并用上清液冲洗管内余血2～3次，最后将试管内的液体混匀。
[注意事项]
1、所选择采血部位的皮肤应完整，无烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症等。除特殊情况外，不要在耳垂采血。半岁以下婴幼儿由于手指小，可自拇指、脚趾或足跟内、外侧缘采血；严重烧伤者可选皮肤完整处采血。
2、本试验具有创伤性，必须严格控无菌技术操作，防止采血部位感染；做到一人一针一管，避免交叉感染，最好用一次性采血管。
3、皮肤消毒后，应待乙醇挥发后采血，否则流出的血液扩散而不成滴。
4、进出针速度要迅速，且伤口要有足够的深度。
5、因第1滴血混有组织液，应擦去。如血流不畅切勿用力挤压，以免造成组织液混入，影响结果的准确性。
实验一 红细胞计数
[目的]掌握显微镜红细胞计数的方法。
[原理]用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。
[器材]显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒。
[试剂]红细胞稀释液
[标本]外周血或抗凝血（EDTA抗凝)。
[操作]
1、加稀释液 取小试管1支，加红细胞稀释液2ml。
2、加血 用清洁干燥微量吸管采集末稍血或抗凝血10ul擦去管外余血，轻轻加至红细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2～3次，立即混匀。
3、充池 混匀后用微量吸管或玻璃棒将红细胞悬液充入计数池，室温下平放3～5min，待细胞下沉后于显微镜下计数。
4、计数 用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。
5、计算
25 N
红细胞/L=N×5×10×106×200=N×1010=100 ×1012
N：表示5个中方格内数得的红细数。
25
× 5 ：将五个中方格红细胞数换算成1个大方格红细胞数。
×10：将1个大方格红细胞数换1ul血液内红细胞数。
×106：1L=106ul
200：为血液的稀释倍数。
[注意事项]
1、采血时不能过分挤压采血部位，针刺激深度必须适当。
2、采血应顺利、准确，采血部位不得有水肿、发绀、冻疮、炎症等。红细胞数量明显增高时可适当加大稀释倍数。
3、大小方格内压线细胞的计数遵循数上不数下、数左不数右的原则，避免多数或漏数。
4、将细胞悬液充入计数池时要一次完成，不能产生满溢、气泡或充池不足的现象。
实验二 血红蛋白测定
[目的]掌握氰化高铁血红蛋白测定方法。
[原理]在血红蛋白转化液中，除硫化血红蛋白外，其余血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子结合，生成稳定的复合物氰化高铁血红蛋白。棕红色的氰化高铁血红蛋白在波长540nm处有吸收峰，可用校准的高精度分光光度计进行直接定量测定，或用HiCN参考液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。
[器材]一次消毒采血针，微量吸管，试管，5ml移液管，75%乙醇棉球，无菌干棉球，分光光度计
[试剂]HiCN转化液（文齐液)
[标本]外周血
[操作]
1、直接定量测定
（1)加转化液：试管内加5mlHiCN转化液。
（2)采血与转化：取全血20ul，加到盛有转化液的试管底部，用上清液反复冲洗吸管3次，充分混合，静置5min。
（3)测定：以符合WHO标准的分光光度计，波长540nm处，光径1.000cm，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度。
（4)计算：根据标本的吸光度直接计算出血红蛋白浓度（g/L)
64458
血红蛋白（g/L)=A×44000×251=A×367.7
A：540nm处测定管吸光度
64458：目前国际公认的血红蛋白平均相对分子质量。
44000：1965年国际血液学标准化委员会（ICSH)公认的血红蛋白摩尔消化系数。
251：稀释倍数。
2、HiCN标准液比色法测定
（1)标准曲线绘制和K值计算。用HiCN标准液倍比稀释后（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L)，在所用的分光光度计上分别测事实上各稀释度的吸光度，以标准品血红蛋白含量为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线索。或求出换算常数K。
（2)标本的血红蛋白转化和比色同直接定量测定，得到标本的吸光度（A)
（3)通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g/L)=K×A。
[注意事项]
1、血红蛋白测定方法很多。但无论采用何种方法，都必须以HiCN法为标准，绘制标准曲线。标准曲线或K值应定期检查，并与分光光度计相配。
2、标准微量吸管必须经过水银称重法校正。加液量必须准确，血液与转化液充分混匀。可用血红蛋白液代替抗凝血进行鉴定。
3、HiCN转化液不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN—丢失，测事实上结果偏低。HiCN转化液应贮存在棕色有塞玻璃瓶中，4℃冰箱保存一般可用数月，但不能在0℃以下保存，因为结冰可引起高铁氰化钾还原，使转化液褪色失效。
[目的] 掌握网织红细胞手工计数的操作方法
[原理] 网织红细胞胞质内残存的少量核蛋白体和核糖核酸等嗜碱性物质，在活体染色时可被煌焦油蓝染成蓝色网状或颗粒状，可与完全成熟的红细胞区别。
[器材]显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁液、试管、玻片
[试剂]10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液
[标本]新鲜全血
[操作]
1、加染液 于小试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加入新鲜全血2滴，立即混匀，置室温下15～20min。
2、制备涂片 取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
3、观察 在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
4、计数 在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞数。
5、计算
计数的网织红细胞数
网织红细胞分数数= 1000
网织红细胞绝对值（网织红细胞/L)=红细胞/L×网织红细胞分数数
[目的]掌握魏氏法红细胞沉降率测定的原理及操作方法。
[原理]将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于特制血沉管中，直立于特制血沉架上1h后读取红细胞下沉后血浆的高度。
[器材]Westergren血沉管、血沉架、吸管、试管。
[试剂]109mmol/L枸橼酸钠溶液
[标本]新鲜全血
[操作]
1、加抗凝剂 吸取浓度为109mmol/L的枸橼酸钠0.4ml于试管中。
2、采静脉血 取静脉血1.6ml，加入含抗凝剂的试管中，混匀。
3、装血沉管 用血沉管吸入混匀全血至刻度“0”处，拭去管外残留余血。
4、立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。
[注意事项]
1、使用分析纯枸橼酸钠抗凝剂，配制时浓度应准确，配成后液体不浑浊、无沉淀，保存期为2周。
2、严格控制采血量，使抗凝剂与血液比例为1︰4。
3、血沉管内径要标准，放置要垂直，不得倾斜。
[目的]掌握显微镜法白细胞计数的原理及方法。
[原理]用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。
[器材]显微镜、改良Neubauer计数板、试管、吸管、微量吸管、滴棒。
[试剂]白细胞稀释液
[标本]新鲜全血或末稍血
[操作]
1、加稀释液 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。
2、吸取血液 用微量吸管吸取新鲜全血或末稍血20ul， 擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管2～3次。
3、混匀 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色。
4、充池 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的计数池中，室温静置2～3min，待白细胞完全下沉。
5、计数 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数。
6、计算
4个大方格内白细胞数（N) N
白细胞= 4 ×10×20×106=20×109/L
[注意事项]
1、稀释用吸管、微量吸血管、血红细胞计数板均为计量工具，使用前需经过严格的校正，否则将直接影响计数结果的准确。
2、使用标本可为由静脉搏穿刺采取的新鲜全血，也可为静脉末梢血。采集末梢血时，应注意采血部位不得有冻疮、水肿、发绀、炎症等，以免标本失去代表性；同时也应注意不能过度挤压，以免组织液混入引起血液凝因或造成计数结果不准确。
3、在充池时，如充液不足、液体外溢、断续充液，或产生气泡、充液后移动盖玻片等，均会使细胞分布不均匀，造成计数结果不准确。
4、计数池内的细胞分布应均匀，一般情况下各大方格间的细胞数相差不超过10%，若相差太大，应重新充池。
5、计数大小方格内的压线细胞时，遵循数上不数下、数左不数右的原则。
6、白细胞数量过多时，可采用加大稀释倍数的方法。
[目的]掌握显微镜外周血白细胞分类计数的方法及各种白细胞的正常形态。
[原理]将血液制成细胞分布均匀的血涂片，用瑞氏染液染色，根据各类细胞的形态特点和颜色差异将白细胞进行分类并计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占的百分率。
[器材]显微镜、分类计数器、香柏油、拭镜纸、清洁液。
[试剂]瑞氏染液、磷酸盐缓冲液
[标本]制备良好的血涂片
[操作]
1、染色 将血涂片用瑞氏染液染色，冲洗干净，自然干燥后待用。
2、低倍镜观察 低倍镜下观察白细胞分布和染色情况。
3、油镜观察 选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域，按一定的方向顺序对所见的每1个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器作好记录，共计数100个白细胞。
4、计算 求出各类细胞所占的百分率
[注意事项]
1、由于各种白细胞体积大小不等，体积较小的淋巴细胞在血涂片的头、体部较多，而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多，因此分类最佳区域为体、尾交界处。
2、分类时要有秩序地、没一定方向连续地进行，既不重复亦不遗漏，避免主观选择视野。
3、分类计数结果的记录也可采用手工画“正”或“++++”的方法。
[目的]掌握各种白细胞病理形态学改变。
[原理]用普通光学显微镜，直镜观察经瑞氏染色后血涂片上的白细胞。从细胞大小、细胞核、细胞质等多方面观察细胞形态。
[器材]显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁液。
[试剂]瑞氏染液、磷酸盐缓冲液
[标本]制备良好的血涂片
[操作]
1、染色 将血涂片用瑞氏染液染色，冲洗干净，自然干燥后待用。
2、低倍镜观察 低倍镜观察细胞分布、数量、染色情况。
3、油镜观察 滴加香柏油1滴，在油镜下对白细胞从细胞大小、细胞核、细胞质等多方面做认真仔细地观察。
4、计算毒性指数 观察100或200个中性粒细胞，记录有病理变化的中性粒细胞数量，计数毒性指数。
有中毒颗粒的中性粒细胞数
毒性指数= 计数的中性粒细胞数
[注意事项]
1、含中毒颗粒的中性粒细胞应与嗜碱性粒细胞相区别，其区别要点是嗜碱性粒细胞核较少分叶，染色较浅，嗜碱性颗粒着色更深，较大且不均匀，细胞边缘常分布较多，也可覆盖分布于细胞核上。
2、在血涂片染色偏碱或染色时间过长时，可将中性颗粒误认为中毒颗粒。应注意全片各种细胞的染色情况。
[目的]掌握嗜酸性粒细胞直接计数的方法。
[原理]用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定倍数，使大部分的红细胞和其他白细胞被破坏并使嗜酸性粒细胞着色。将稀释的细胞悬液滴入血细胞计数板，计数一定体积内的嗜酸性粒细胞数量，经过换算得出每升血液中的嗜酸性粒细胞数量。
[器材]显微镜、改良Neubauber计数板、试管、吸管、微量吸管、滴棒。
[试剂]
1、伊红丙酮稀释液。
2、Hinkelman稀释液。
3、乙醇-伊红稀释液。
4、皂素-甘油稀释液。
5、溴甲酚紫稀释液。
6、固绿稀释液。
[标本]新鲜全血或末梢血
[操作]
1、加稀释液 吸取嗜酸性粒细胞稀释液0.38ml于小试管中。
2、采血 用微量吸管采血20ul，擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管稀释液的底部，轻轻放出血认，并吸取上层稀释液清洗吸管2～3次。
3、混匀 将试管中的血液与稀释液混匀，待细胞完全溶解。
4、充池 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的2个计数池中，室温下静置3～5min。
5、计数 低倍镜下计数2个计数池共10个大方格内的嗜酸性粒细胞数量。
6、计算
10个大方格内的嗜酸性粒细胞
嗜酸性粒细胞/L= 10×10×20×106
[注意事项]
1、凡能引起白细胞计数误差的因素，嗜酸性业细胞计数时均匀应注意。
2、计数应在60min内完成，因时间太长，嗜酸性粒细胞会被逐渐溶解，造成结果偏低。
3、血液加入稀释液后应立即混匀，否则易致血液凝固和细胞聚集。因嗜酸性粒细胞易于破碎，振荡不宜太猛烈。若使用含甘油的稀释液，因甘油造成液体粘稠度增加，可增加振荡次数、延长振荡混匀时间。
[目的]掌握血小板的显微镜目视计数方法。
[原理]血液经稀释液按一定比例稀释和破坏红细胞后，充入血细胞计数板内在显微镜下计数一定范围内的血小板数量，经过换算求出每升血液中血小板的数量。
[器材]显微镜，血细胞计数板，采血针，血红蛋白吸管，试管。
[试剂]10g/L草酸铵稀释液。
[标本]外周血
[操作]
1、吸取稀释液 准确吸取10g/L 草酸铵稀释液0.38ml，置于清洁小试管中。
2、采血 常规消毒无名指，穿刺后，让血液自然流出，准确采血20ul，置于含有草酸铵的稀释液中，立即充分混匀。
3、稀释静置 待完全溶血后再混匀1min，置室温10min。
4、充液静置 取混匀的血小板悬液1滴充入血细胞计数板内，静置10～15min，使血小板充分下沉。空气干燥的季节应将血细胞计数板置湿盒内。
5、计数 用高倍镜计数血细胞计数板中央大方格内的四角和中央共5个中方格内血小板数量。
6、计算 每升血小板数=5个中方格内血小板数×109/L
[注意事项]
1、草酸铵稀释液要清洁，无细菌、尘埃等污染。存放时间较长后应过滤后再使用。
2、毛细血管采血时，针刺应达3mm深，使血液流畅。拭去第1滴血后立即采血，以防血小板聚集和破坏。如果同时做白细胞和血小板计数时，应先采血做血小板计数。
3、血液加入血小板稀释液内要充分混匀，但不可过度振荡，以免导致血小板破坏和聚集。
4、血小板悬液充入血细胞计数板内需要静置10～15min，使血小板完全下沉后再计数。但应注意保持湿度，避免水分蒸发而影响计数结果。
5、计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃等的鉴别，附着在血红细胞旁的血小板也要注意，不要漏数。
6、应在1h内计数完毕，否则结果偏低。
7、所用计量器材必须标准化。
8、检查前，患者应避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板药物。
[目的]掌握尿量的测定方法及注意事项。
[原理]采用有刻度的容器测定24h尿量。
[器材]量杯或量筒、洁净容器。
[标本]24h尿液。
[操作]清晨将尿液排空后弃去，用洁净容器留取随后的24h尿液，混合后准确测定尿量。
[注意事项]每次留取标本必须排空膀胱，尿量测定精确至毫升。气温过高时注意防腐。
[参考值]①成年人：1000～2000ml/24h。②1～6岁：300～1000ml/24h。③7～12岁：500～1500ml/24h。
[目的]了解常用干化学试带测定尿液酸碱度的方法、原理及注意事项。
[原理]干化学试带的测试模块区含有甲基红和溴麝香草酚蓝，两种酸碱指示剂适量配合可测试尿液酸碱度。
[器材]洁净试管或尿标。
[试剂]尿多联化试带与标准色板。
[标本]新鲜尿液。
[操作]将试带用尿液浸湿后与标准色板比色，1min内读取pH。
[注意事项]
1、试带应在干燥、避光处保存，注意保质期，定期内标准质控液进行检测。
2、按说明书操作，1min内读取结果。
3、标准应新鲜，否则细菌繁殖会使pH增高。或因丧失挥发性酸而影响结果的准确性。
4、尿液pH还可作为其他检查项目的质控指标，若pH＜3或pH＞9均会影响其他检测结果。
[目的]掌握尿蛋白定性的磺基水杨酸法。
[原理]磺基水杨酸是一种生物碱，在酸性条件下，磺基水杨酸的磺酸根离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性的蛋白盐沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白质含量。
[器材]小试管、滴管、吸管、黑色衬纸及pH广泛试纸。
[试剂]200g/L磺基水杨酸溶液。
[标本]新鲜尿液或人工蛋白尿标本。
[操作]
1、加尿液 取小试管2支，各加清晰尿液1ml。
2、加试剂 于第1支试管内滴加磺基水杨酸溶液2滴，轻轻混匀；另1支试管不加试剂作空白对照，1min内观察结果。
3、判断结果 按表判断阳性程度及蛋白质的含量
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结果 报告方式 相当蛋白质含量（g/L)
清晰透明 — ＜0.05
在黑色背景上可见轻度浑浊 极微量 0.05～0.1
不需黑色背景即见轻度浑浊± 0.1～0.5
白色浑浊，但无颗粒出现 + 0.5～1.0
浑浊并出现颗粒 ++ 1.0～2.0
明显浑浊呈现絮状 +++ 2.0～5.0
浑浊，有大凝块++++ ＞5.0
[注意事项]
1、该法灵敏，极轻微反应无意义。判断结果应及时，否则会使阳性增高。
2、尿内含尿酸或尿酸盐过多。可出现假阳性，但反应较为缓慢，15s后出现浑浊，由弱渐强；或于加试剂1min后渐呈蛛丝状浑浊，缓慢扩散，覆盖于尿液的表面，加热或加碱可消失。
3、含碘造影剂、大剂量青霉素等也可使反应呈假阳性，但其反应与蛋白尿不同。应仔细观察并结合用药情况综合分析。
[目的]了解尿液蛋白质定量双缩脲法的反应原理、检测方法。
[原理]钨酸可沉淀尿中的蛋白质，后者复溶于双缩脲试剂中，其碱性的Cu2+与蛋白质的肽键形成紫色复合物，呈色深浅与尿蛋白质含量成正比。
[器材]试管、滴管、分光光度计、离心机等
[试剂]
1、200g/L磺基水杨酸溶液。
2、15g/L钨酸钠溶液。
3、0.075mol/L硫酸。
4、双缩脲试剂。
5、蛋白标准液。
6、生理盐水。
[标本]新鲜尿液
[操作]
1、测定尿量 准确测定患者24h尿量，反复混匀后取10ml离心沉淀留取上清液备用。
2、尿蛋白定性 采用磺基水杨酸法定性尿蛋白，阳性标本进行下列测定。
3、加标本处理
①加尿液：根据蛋白质半定量的结果决定标本的加入量。尿蛋白定性（+)～（++)，于10ml离心管中加尿液5ml，如定性（++)～（+++)，则取1ml尿液加4ml蒸馏水稀释。
②加沉淀剂：向离心管加入0.075mol/L硫酸2.5ml，混匀后再加15g/L钨酸钠溶液2.5ml，充分混匀后静置10min。
③离心：1500r/min离心5min后，倾尽上清液，将离心管倒置于干燥滤纸上吸干水分，保留沉淀待测。
④复溶：向沉淀中加生理盐水至1ml刻度，振摇以使蛋白质溶解，作为测定管。
4、双缩脲反应 按表测定，混匀后37℃水浴30min
尿蛋白定量双缩脲法
试剂 测定管标准管 空白管
生理盐水 1.0 __
2.5g/L蛋白标准液 _ 1.0_
双缩脲试剂4.0 4.0 4.0
5、比色和计算 波长540nm，空白管调零分别读取A标A测。
A测 24h尿量（ml)
24尿蛋白总量（g)= A标 ×2.5× 1000（ml)
[注意事项] 24h尿标本最好不加防腐剂，冷藏保存，测定前充分混匀。
[目的]掌握尿葡萄糖定性的班氏法。
[原理]葡萄糖或其他还原性糖的醛基在热碱性溶液中，能将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原为黄色的氢氧化亚铜，进而形成红色氧化亚铜沉淀。
[器材]试管架、中试管、滴管、试管夹、酒精灯。
[试剂]
1、甲液 枸橼酸钠，无水碳酸钠，蒸馏水加热助溶。
2、乙液 硫酸铜，蒸馏水加热助溶。冷却后，将乙液缓慢加入甲液中，不断混匀，冷却至室温后补充蒸馏水至1000ml。如溶液不透明则需要过滤，煮沸后出现沉淀或变色则不能应用。
[标本]新鲜尿液
[操作]
1、鉴定班氏试剂质量 取中号试管1支，加入班氏试剂2.0ml，摇动试管徐徐加热至沸腾，观察试剂有无颜色及性状变化，若试剂仍为透明蓝色，可进行以下实验。
2、加尿液 向班氏试剂中加离心后的尿液0.2ml，混匀。
3、加热煮沸 继续煮沸1～2min，或置沸水浴5min，自然冷却。
4、判断结果 判断结果见表
糖定性试验结果判断
反应现象 报告方式 葡萄糖含量（mmol/L)
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蓝色不变 — ＜5.6
蓝色中略带绿色,但无沉淀 ± 5.6～11.2
绿色,伴少许黄绿色沉淀 +＜28
较多黄绿色沉淀,以黄为 ++ 28～56
土黄色浑浊,有大量沉淀+++ 57～112
大量棕红色或砖红色沉淀 ++++ ＞112
[注意事项]
1、试剂与尿液的比例为10︰1。
2、煮混时应不时摇动试管以防爆沸喷出，出可在沸水浴中实验。
3、检验糖尿病患者尿液中葡萄糖，应空腹或餐后2h留取尿标本。
4、尿液中有大量尿酸盐存在时，煮沸后也呈浑浊并带绿色，但久置后并不变黄色而呈灰蓝色，故必须于冷却后观察结果。尿中含大量铵盐时可抑制氧化亚铜沉淀的生成，应加碱煮沸除去。蛋白含量较高时也影响铜盐的沉淀，可用加热乙酸法除去。
5、一些非糖还原性物质，如水合氯醛、氨基比林、PAS、阿匹林、青霉素、链霉素、VitC、异烟肼等，当基在尿中含量过高时亦呈阳性反应，应停药3d后再进行检查。对静脉输注大剂量VitC者5d内不宜做尿糖定性，或定性时先将尿液煮沸使之分解破坏。
[目的]掌握尿沉渣非染色法显微镜检查的内容和方法。
[原理]采用显微镜观察的方法，根据尿液细胞、管型等有形成分的形态特征，识别并记录其在显微镜一定视野内的数量。
[器材]载玻片、离心机、刻度离心管、盖玻片、滴管、普通显微镜、定量尿沉渣分析板。
[标本]新鲜尿液
[操作]
1、未离心直接涂片法
（1)混匀：充分混匀尿液。
（2)制备涂片：取混匀的尿液1滴于载玻上，加盖玻片，注意避免产生气泡。
（3)观察计数：①先用低倍观察全片细胞、管型等成分的分布情况，然后用高倍镜确认。注意使用暗视野观察尿液有形成分，特别是透明管型。②管型在低倍镜下观察，至少计数20个视野；细胞在高倍镜下观察至少计数10个视野，取其平均值报告；结晶按高倍镜视野中分布范围报告。计数时要注意细胞的完整性，还要注意有无其他异常巨大细胞、寄生虫虫卵、滴虫、细菌、粘液丝等，男性尿液标本还要注意有无精子及卵磷脂小体。
2、离心沉淀涂片法
（1)离心尿液：透用于尿外观非明显浑浊的尿标本，是尿沉渣检查标准化推行的方法。取尿液10ml离心5min，要求相对离心力为400g。
（2)提取尿沉渣：手持离心管倾斜45°～90°，用滴管吸去上层尿液，保留下层0.2ml尿沉渣。
（3)涂片：轻轻混匀尿沉渣后，取1滴置载玻片上，用18mm×18mm或22mm×22mm的盖玻片覆盖后显微镜检查。
（4)观察计数：与未离心尿直接涂片法相同。
3、定量尿沉渣分析法 定量尿沉渣分析板由1块硬质塑料板制成，每块板内分为10个统一深度的计数池，每1个计数池内的计数区为1.0ul计数区分为10个大方格，每个大方格又分为9个小方格。
（1)未离心法：直接取充分混匀的尿液1滴充入定量尿沉渣分析计数池内，在低倍镜下计数10个大方格内管型总数，在高倍镜下计数10个大方格内细胞总数，此即每微升尿液某种细胞或管型的数量。
（2)离心法：尿液标本处理同离心尿沉淀涂片法，然后充池计数，方法同上。
4、报告结果
（1)涂片法：细胞以最低数～最高数/HP、管型以最低数～最高数/低倍镜视野报告。结晶以所占视野面报告，无结晶为（—)；结晶占1/4视野（+)；结晶占1/2视野为（++)；结晶占3/4视野为（+++)；结晶满视野为（++++)。如果细胞、管理的数量过多难以计算，也可按结晶的报告方式报告结果。
（2)定量尿沉渣分析板法：以每微升某种细胞或管型数报告。
[目的]掌握脑脊液显微镜检查的内容、方法。
[器材]显微镜、改良牛鲍计数板、微量吸管、刻度吸管、小试管。
[试剂]生理盐水或红细胞稀释液，冰乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞-吉染液。
[标本]新鲜脑脊液。
[操作]
（1)充池：直接用微量吸管吸取混匀的脑脊液，充入血细胞计数板的上下2个计数池。
（2)计数：静置2～3min后，低倍镜下计数2个计数池内四角和中央大方格共10个大方格内的细胞数。
（3)计算：10个大方格内的细胞总数即为每微升脑脊液细胞总数，再换算成每升脑脊液细胞总数。
[注意事项]
1、直接白细胞计数时，也可用微量吸管吸取冰乙酸后尽可能全部吹出，仅使吸管内壁粘附少许冰乙酸，再吸以少量混匀的脑脊液于吸管中，数分钟后吸管内红细胞溶解，然后再充池计数。
2、细胞计数时，如发现较多细胞有皱缩或肿胀等异常现象，应如实报告，以协助临床医学鉴别会计资格是陈旧性出血或新鲜出血。
3、血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值，校正方法是分别计数血液红细胞、白细胞数和脑脊液细胞总数、白细胞数，扣除因出血而带进脑脊液的白细胞数。
脑脊液红细胞数×血液白细胞数
白细胞校正数脑脊液白细胞未校正数— 血液内红细胞数
4、细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1滴，混匀后涂片。
5、涂片染色分类时，如见内皮细胞或异常细胞，则另行描述报告，必要时用巴氏或HE染色查找肿瘤细胞。
6、实验结果后，血细胞计数板用0.75%乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免损坏计数板。
[目的]掌握脑脊液蛋白质定性试验的方法。
[原理]脑脊液中球蛋白与苯酚结合，形成不溶性蛋白盐而产生白色浑浊或沉淀。
[器材]小试管、刻度吸管、尖滴管。
[试剂]饱和苯酚溶解。
[标本]新鲜脑脊液。
[操作]
1、加试剂 取试剂2ml于小试管中。
2、加标本 用尖滴管垂直滴加脑脊液标本1～2滴。
3、观察结果 在黑暗背景下立即用肉眼观察结果。
4、判断结果
（1)清晰透明，不呈现云雾状为（—)。
（2)呈微白雾状，对光不易看见，黑色背景下才能见到（±)。
（3)灰白色云雾状为（+)。
（4)白色浑浊或白色薄云状沉淀为（++)。
（5)白色絮状沉淀或白色浓云块状为（+++)。
（6)立即形成白色凝块为（++++)。
[注意事项]
1、当室温在10℃以下时，应将试剂保存在37℃温箱中，否则饱和度降低，可致假阳性。
2、试管内径以小为佳，一般为（13±1)mm，加入试剂后立即观察结果。
3、标本中如红细胞过多，应离心沉淀取上清液检测。
[目的]掌握浆膜腔积液显微镜检查的内容、方法。
[器材]显微镜、改良牛鲍计数板、微量吸管、小试管。
[试剂]生理盐水或红细胞稀释液，冰乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞-吉染液。
[标本]浆膜腔穿刺液。
[操作]
（一)有核细胞计数
1、直接计数法
（1)去除红细胞：在小试管内放入冰乙酸1～2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰乙酸后倾去，滴加混匀浆膜腔积液3～4滴，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。
（2)充池：用微量吸管取混匀破坏红细胞后的浆膜腔积液充入血细胞计数板的2个计数池内。
（3)计数：静置2～3min后，低倍镜计数2个计数池内四周和中央大方格共10个大方格内的有核细胞数。
（4)计算：10个大方格有核细胞总数即每微升浆膜腔积液的有核细胞总数，再换算成每升浆膜腔积液的有核细胞数。
2、稀释计数法
（1)稀释破坏红细胞：根据标本内有核细胞多少，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。
（2)充池：用微量吸管取混匀稀释后的浆膜腔液充入1个计数池。
（3)计数：静置2～3min后，低倍镜计数1个计数池内的四角和中央大方格共5个大方格内的有核细胞总数。
（4)计算：根据5个大方格内的有核细胞总数稀释倍数，计算每升浆膜腔积液的有核细胞数。
（二)有核细胞分类
1、直接分类法 有核细胞计数后，将低倍镜转为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞形态和细胞核形态进行分类，共分类计数100个有核细胞，分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞及间皮细胞)和多个核细胞（粒细胞)的百分率。
2、涂片染色分类法 在抽出穿刺液后，立即以1000r/min离心5min，取沉淀物制成均匀的薄片，置于室温下或37℃恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞-吉染色后油镜分类计数100个有核细胞。一般标本中可见到淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、间皮细胞等。
[注意事项]
1、有核细胞计数应包括间皮细胞。
2、必要时可采用细胞玻片离心沉淀仪收集细胞，以提高白细胞分类计数的准确性。
3、有核细胞分类计数误差大，尤其是陈旧性、细胞变形的标本，故推荐采用涂片染色分类计数。
4、染色分类计数过程中，若发现间皮细胞和不能分类的异常细胞应中外描述或作HE、巴氏染色查找肿瘤细胞。
[目的]掌握浆膜腔液粘蛋白定性（李凡他试验)的方法。
[原理]浆膜腔上皮细胞在炎症刺激下分泌粘蛋白。粘蛋白是一种酸性糖蛋白，其等电点pH为3～5，因此，可在稀乙酸中出现白色沉淀。
[器材]100ml量筒，滴管。
[试剂]冰乙酸、蒸馏水。
[标本]浆膜腔穿刺液
[操作]
1、加试剂 加2～3滴冰乙酸于100ml量筒中，再加大约100ml蒸馏水，混匀，此时溶液的pH为3～5，静置数分钟。
2、加标本 垂直滴加待测标本1滴于量筒中。
3、观察结果 立即在黑色背景下观察有无白色云雾状沉淀生成及其下降程度。
4、判断结果
（1)阴性、阳性结果的判断。
1)阴性：清晰，不显雾状或有轻微白色雾状浑浊，但在下降过程中消失。
2)阳性：出现白色雾状浑浊并逐渐下沉至量筒底部不消失。
（2)阳性程度的判断
1)渐呈白雾状为（±)
2)可见灰白色雾状为（+)
3)白色薄云状为（++)
4)白色浓云状（++++)
[注意事项]
1、血性浆膜腔积液经离心沉淀后，用上清液进行检查。
2、量筒的高度与蒸馏水的量要足够。
3、加入标本后立即在黑色背景下仔细观察结果。如浑浊不明显，下沉缓慢，中途消失者为阴性。
[目的]掌握精子活动率和活动力的检查方法。
[原理]精液液化后，将精液滴于载玻片上，显微镜下观察精子的活动情况，计算活动率和活动力。
[器材]显微镜，载玻片，盖玻片。
[试剂]5g/L伊红Y染液
[标本]新鲜液化精液。
[操作]
1、计算精子活动率 取液化精液1滴于载玻片上，加盖玻片，高倍镜下观察100个精子，计数有尾部活动精子数，计算其百分率，即精子活动率。
2、观察精子活动力 在观察活动率的同时，观察精子活动的强度，将精子活动分为a、b、c、d四个级别，即精子活动力。a级：精子呈前向快速运动；b级：缓慢或呆滞的前向运动；c级：非前向运动；d级：死精子。
3、染色 若不活动精子大于50%，可进行体外活体染色，以鉴别其死活。取新鲜液化精液和伊红Y染液1滴于载玻片上，混匀，1min后推成薄片，自然干燥后于显微镜（高倍镜)下观察。死精子呈红色，活精子不着色。观察100个精子，以不着色精子的百分率报告精子活率。
[注意事项]
1、排精后1h内送检，时间过长，精子活动率和活动力减低。
2、检查时注意保温，温度过低，精子活动率、活动力下降。
[目的]掌握精子计数的方法
[原理]采用碳酸氢钠破坏精液的粘稠度，甲醛固定精子，然后充计数池，显微镜下计数一定范围内的精子数，换算成每升精液中的精子数。
[器材]显微镜，血红细胞计数板，小试管。
[试剂]精子稀释液。
[标本]新鲜精液化精液。
[操作]
1、取稀释液 取精子稀释液0.38ml于小试管内。
2、加精液 加入混匀的液化精液20ul，充分混匀。
3、充池 取1滴精子悬液充入计数池内，静置3～5min。
4、观察 高倍镜下计数中央大方格内四角及中央5个中方格内的精子数。
5、计算
精子计数=5个中方格内精子数×109/L
精子总数=精子数/L×精液量（ml)×10-3
[注意事项]
1、精子数量变异较大，较准确的计数应在2～3个月内分别取3份或更多的精液标本检查。出现1次异常结果，应间隔7d后再复查，反复查2～3次后方能得出较准确结果。
2、如常规检查未发现精子，应离心后取沉淀物检查，若仍无精子才能确定为精子症。
[目的]掌握精子正常形态及其检查方法。
[原理]正常精子形似蝌蚪，分头、体、尾三部分，长约50～60um。头部呈椭圆形，尾长可弯曲，经过瑞特染色后，显微镜下观察100～200个精子，观察形态正常和异常精子数及其所占的比例。
[器材]显微镜，载玻片，香柏油。
[试剂]Wright染液。
[标本]新鲜液化精液。
[操作]
1、涂片并染色 取液化精液1滴于载玻片上，直接涂片，自然干燥后行Wright染色。
2、观察结果 油镜下计数200个精子，观察有无异形精子，同时计数精子凝集情况。
3、结果判断
（1)头部异常：有大头、小头、尖头、双头、梨形头、无定形头及头部边缘不齐等。
（2)体部异常：有分支、双支、体部肿胀甚至消失。
（3)尾部异常：有双尾、卷曲尾、断尾、尾部消失等。
[注意事项]
1、观察精子形态的同时也要注意有无红细胞、白细胞、上皮细胞和肿瘤细胞等。
2、注意观察有无未成熟的生殖细胞，如发现未成熟生殖细胞，应计数200个生殖细胞（包括精子)，计算其未成熟生殖细胞百分率。
3、如果精子数＞10×109/L，可直接涂片检查；如果＜10×109/L，则应将精液离心15～20min后，取沉淀物涂片检查。
4、衰老的精子体部也可膨大并有被膜，不宜列入异形精子。
一、阴道分泌物理学检查
[目的]掌握阴道分泌物的理学检查的方法及内容。
[原理]通过理学检查方法对新鲜阴道分泌物进行检查，以观察其颜色和pH变化。
[器材]消毒棉拭子，pH试纸。
[标本]新鲜阴道分泌物。
[操作]
1、观察外观 肉眼仔细观察阴道分泌物的颜色。
2、测定酸碱度 用pH试纸检测其酸碱度。
二、阴道分泌物显微镜检查
[目的]掌握阴道分泌物显微镜检查的方法及内容。
[原理]利用显微镜对阴道分泌物湿片和染色涂片检查，观察其清洁度和有无特殊细菌及细胞等。
[器材]显微镜，载玻片。
[试剂]
1、2.5mol/L KOH溶液。
2、生理盐水。
3、革兰染液。
[标本]新鲜阴道分泌物
[操作]
1、湿片检查
（1)取阴道分泌物后滴加1滴生理盐水，制成涂片。
（2)低倍镜观察后，再用高倍镜检查，根据上皮细胞、白细胞（或脓细胞)、杆菌、球菌的多少，判断阴道清洁度。
（3)检查清洁度的同时，高倍镜观察有无阴道毛滴虫。
（4)于阴道分泌物涂片上加1滴2.5mol/LKOH，混匀后加盖玻片，先用低倍镜观察言观色，若发现有菌丝样物，再换高倍镜，检查有无真菌。
2、染色涂片检查
（1)取阴道分泌物涂片，自然干燥后，行革兰染色。
（2)显微镜下检查有无致病菌。
3、结果判断 阴道分泌物清洁度结果判断
[注意事项]
1、取材要准确，并及时送检。否则会导致阴道毛滴虫死亡、淋病奈瑟菌自溶。
2、阴道清洁度检查时，标本必须新鲜，防止污染。
3、检查阴道毛滴虫时应注意保温。
4、湿片检查阴性时，应再用Wright染色或革兰染色，一次阴性不能排除诊断。
