实验七  细菌的变异

细菌和一般生物一样，也具有遗传性和变异性。细菌在一定的环境条件下，其性状相对稳定，传给后代，维持其种属的特性称细菌的遗传性。而细菌子代与亲代生物学性状上存在程度不同的差异，称为变异。在一定环境条件下细菌遗传物质结构的改变，将会引起细菌的性状发生改变，分为表型变异与基因型变异。如L型细菌的变异，表现为细菌细胞壁的缺陷。有的细菌从有鞭毛到失去鞭毛的变异，亦称H-O变异。

研究细菌的变异性有助于疾病的诊断、预防、治疗。

（一)细菌的L型变异

【原理】

细菌被溶菌酶水解或被抗生素(如青霉素)阻止肽聚糖合成后，都将失去细胞壁，在渗透压平衡的培养基中，革兰阳性菌呈原生质体，革兰阴性菌呈圆球体，若继续生长和分裂，则称为L型菌。若处于低渗环境中，细菌将膨胀和破裂。

【材料】

1．L型培养基 牛肉浸液800ml，蛋白胨20g，氯化钠50g，无菌人血浆200ml，琼脂8g，pH7.4，常规高压灭菌，倾注平板时加入无菌血浆。

2．新青霉素Ⅱ药物滤纸片，每片含药为40µg。

3．革兰氏染色液和细胞壁染色液。

4．金黄色葡萄球菌肉汤培养物。

【方法】

1．于L型培养基内均匀涂布0.05ml金黄色葡萄球菌肉汤。取青霉素药片1张贴于平板中央，置37℃培养。

2．低倍镜下逐日观察滤纸片周围抑菌圈内有无油煎蛋状小菌落(即L型菌落)出现。

3．取L型菌落和原菌(作对照)涂片，均分别作革兰染色和细胞壁染色，油镜观察。

【结果】

抑菌圈内可有油煎蛋状小菌落，染色后可见L型菌呈多形性和细菌壁缺陷现象。与正常菌明显不同。

（二)变形杆菌的鞭毛变异

【材料与方法】

l．取变形杆菌18～24h普通琼脂斜面培养物，分别点种于0.1%石炭酸琼脂平板和普通平板边缘处，切勿划开。

2．置37℃培养24h后，观察和www.med126.com/yishi/比较两种培养基上变形杆菌生长情况。

【结果】

0.1%石炭酸培养基上变形杆菌只在点种处生长，而普通培养基上变形杆菌呈迁移性生长。

（三)细菌的耐药性变异

【原理】

细菌的耐药性可以由非遗传性的生理性适应引起，当药物除去后，细菌耐药性消失；也可以通过下列三种遗传性机理中的任何一种获得耐药性．即基因突变、重组和获得带有耐药基因质粒。这三种类型，除去药物后，细菌仍然具有耐药性，而且可以遗传。

【材料】

1．普通琼脂平板。

2．含青霉素(10～15u/m1)琼脂平板。

3．金黄色葡萄球菌敏感株和耐药株。

【方法】

1．将普通琼脂平板分为两半，分别接种金黄色葡萄球菌青霉素耐药株和敏感株。

2．在含青霉素的平板上，同法接种上述2个菌株。

3．置37℃培养24h后，观察结果。

【结果】

普通平板上，2株细菌均长出菌落；含青霉素平板上，只有耐药株长出菌落。

（四)细菌光滑型与粗糙型的变异

【原理】

细菌菌落有光滑型(smooth,S)和粗糙型(rough,R)。S-R变异是一种全面的变异，除菌落形态不同外，其生化反应性、毒力和免疫原性等也往往发生改变。

【材料】

1．5%石炭酸溶液。

2．普通琼脂平板。

3．S型和R型大肠杆菌18～24h培养物。

【方法】

l．大肠杆菌粗糙型医学全.在线www.med126.com的诱变  将5%石炭酸溶液加于琼脂平板培养基中，使终浓度达到0.05～0.1%。接种S型大肠杆菌于平板上，37℃培养24h后，取单菌落转种于另一上述平板，连续传五、六代即可变为R型。

2．将S型和R型大肠杆菌，分别接种于2个琼脂平板上。

3．置37℃培养24h后，仔细观察比较两型菌落特点。

【结果】

平板上，S型菌落表面光滑、边缘整齐、湿润；R型菌落表面粗糙、边缘不整齐、干皱。