综合性实验三空气、水与人体体表细菌学检查
空气、污水、人体皮肤及与外界相通的腔道均有大量细菌存在，且种类繁多，这些微生物往
往是实验室中各种实验材料、实验菌种污染的祸根，是引起各种感染性疾病的祸根。根据细
菌生
长繁殖的营养条件和细菌对染料的着色情况取样培养检查，即可观察到人类生活环境的各种
细菌。通过对实验室或医院内空气、水和人体体表的细菌检查，我们可了解人体的带菌环
境，
增强对传染病的认识，树立“处处药品数据有菌”和严格的消毒与灭菌观念，在实验过程中严格执行
无菌操作。
医院作为一个特殊的环境，病原体种类繁多、来源广泛；很多细菌呈高度的耐药性，病人又
往往存在一些易感因素。因此，病原体容易通过空气传播和接触传播等，侵入机体引起医院
内感染(Nosocomial infections,Hospital infections)，又称医院获得性感染(Hospital a
cquired infections)。医院内环境监测主要是通过细菌培养的方法，观察空气
各种医学全.在线www.med126.com物体
表面，以及人体体表的细菌总数、细菌种类及其动态变化，以便有的放矢采取措施，控制和
降低医院内感染的发病率；另外，当发生医院内感染暴发流行时，通过环境微生物检查，可
及时发现传染源和传播途径。因此，环境监测是医院感染监测的一个组成部分。
一空气的细菌学检查
【实验目的】
1了解实验室和医院空气的有菌环境，加强消毒、灭菌的观念。
2熟悉医院病房空气的细菌监测方法。
3掌握空气的卫生细菌学检测指标及意义。
【实验原理】
空气是一种重要的疾病传播媒介。在医院，病人的排泄物和分泌物，如飞沫、痰液、脓汁和
粪便等携带大量的微生物，可严重污染空气。某些医疗操作也会造成空气污染，如高速牙钻
修补或超声波清洁牙齿，铺床、清扫及人员走动等也是医院空气微生物的来源。因此，应
对空气进行经常性的卫生监督，检查空气中病原菌较困难，故以经常存在于口腔
和鼻腔的链球菌作为空气卫生的指标，根据空气中链球菌多少以及空气中细菌总数的测定
来判断空气卫生状况、污染程度。
通常采用沉降法检测细菌总数。沉降法是以微生物在空气中能随尘粒下沉的原理，将平板平
放在空气中暴露一定时间，使空气中的细菌直接沉降至培养基表面，然后置37℃孵育24小时
，计算菌落数。按下列公式可得出空气中细菌总数。
每立方米细菌数=50，000N〖〗AT
A：所用平板面积(平方厘米)；T：平板暴露于空气中的时间(分钟为单位)；
N：平板上的细菌菌落数。
【实验内容和方法】
一空气中细菌总数的测定
1取普通营养琼脂平板10个(直径9cm)，在皿底做上记号。
2选择同一房间的5个不同的采样地点，将平板盖打开，平板盖朝下放置在平板旁，分别暴
露于空气中10分钟、30分钟，然后盖好。注明地点、暴露时间。
3平板置37℃温箱培养24小时后取出观察，计算出所生长的菌落数，并比较菌落数量与暴
露时间长短、不同地点的关系。
【注意事项】
●因室内空气中细菌的分布不匀，须在室中央及周角各置一平皿，分别计数后求其平均值。
二空气中链球菌检查法
一般可用血平板作沉降法检查。经培养后，计算培养基上溶血性链球菌和草绿色链球菌的菌
落数，并经涂片染色镜检证实。
附表：
医院各类房间空气中细菌总数要求
细菌数分级〖〗细菌总数/M3〖〗病房类型
最低细菌数〖〗＜10〖〗器官移植、心血管手术室、制剂室
低细菌数〖〗＜200〖〗无菌室或其他手术室、婴儿室、产房、术后恢复室、供应室、中
心灭菌室
一般细菌数〖〗200～500〖〗普通病房、治疗室、放射科、按摩室
注：以上为世界卫生组织建议标准，我国卫生部要求，手术室、产房及婴儿室空气中细
菌总数不得超过500个/M3。
【问题】
①在微生物学实验中，怎样才能避免杂菌的污染?
②为何取链球菌作为空气的卫生指标之一?
③空气的卫生标准规定如何?你的实验结果说明了什么问题?
二水的卫生细菌学检查
【实验目的】
1掌握水的卫生细菌学检测指标及意义。
2熟悉水的细菌总数及大肠菌群数的检测方法。
【实验原理】
水的卫生细菌学检验有两方面的意义，一是从卫生学角度对水质、水源提供有关资料，二是
结合流行病调查检查由水源传播的某些传染病病原菌，为其防治提供证据和对策。在实际工
作中，由于病原菌往往不是水中生长的优势菌，难以检测，所以一般选择具有普遍性和代表
性的微生物作为水的卫生细菌学检验指标，如细菌总数和大肠菌群数，而致病菌的检验往往
只在流行病学调查时以相应的特检方法进行。
细菌总数系指单位重量或体积被检物经处理后，在一定营养、温度和时间条件培养下，所得
细菌菌落总数。国家规定和通常采用的细菌总数测定方法是琼脂倾注平皿法(倾注培养)。大
肠菌群数系指一群在37℃24小时能发酵乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞
杆菌数。大肠菌群数的检测通常采用发酵法。
【实验内容和方法】
一细菌总数检测
【材料】
普通营养琼脂平板无菌生理盐水水浴箱吸管试管
【方法】
1水样采集：自来水样采集先用清洁布将水龙头拭干，再用酒精灯烧灼水龙头周围灭菌，
然后把水龙头完全打开，放水5～10分钟，再将水龙头关小，以无菌三角烧瓶取样。水源水
样或食品(矿泉水、饮料、啤酒、游泳池水等)采集后应立即检验，不得超过4小时。
2自来水可不稀释或作1∶1、1∶10稀释，稀释水立即检验，稀释液用无菌生理盐水。水源
水需根据水的污浊情况决定稀释倍数(1∶10～1∶10000)。
3以无菌吸管各吸取待测水样1ml和0.1ml，分别注入无菌平皿内，每样品不同水量均重复2
个平板。
4溶化普通营养琼脂，冷至45～50℃时(可放在45℃水浴保温)立即倾注于各平板，每板注
量15ml，速与水样混匀，加盖待凝。同时设对照平板1个。
5将平板倒置于37℃恒温箱中培养24小时后计数菌落。
【注意事项】
●应选择菌落数在30～300之间的平板计算菌落数。
●同一稀释度2个重复平板的平均数乘以稀释倍数，即得1ml水中的细菌总数。
●菌落数在100以内时，按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字或10的指数来表示。
二大肠菌群数检测
【材料】
乳糖蛋白胨培养液普通营养琼脂平板伊红—美蓝琼脂平板生理盐水革兰氏染色液
于氏管
【方法】
1初次发酵试验：取10支装有5ml无菌3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基的试管(试管内置倒立管以
指示细菌培养时有无产气)，分别以无菌操作加入自来水样10ml(水源水
取10ml未稀释、1∶10、1∶100水样)，然后将培养瓶和培养管置37℃培养24小时。
2平板分离培养：将上述培养后产酸产气或只产酸的培养物，分别接种于伊红—美蓝琼脂
平板。37℃培养24小时，挑选深紫黑色，具有金属光泽；紫黑色，不带或略有光泽；淡紫色
中心色较深的菌落进行涂片、革兰氏染色、镜检。
3再次发酵试验：上述菌落经革兰氏染色观察，若为阴性无芽胞杆菌，取其相应的典型菌
落1～3个再接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养管(内放倒立管)，37℃培养24小时后，有产酸
、产气者即证实有大肠菌群存在。依据有大肠菌群的阳性管，报告每升水样中的大肠菌群数
。
附：【卫生细菌学指标】
1饮用水：细菌总数＜100个/ml，大肠菌群数≤3/L。
2瓶装汽水果汁类：细菌总数≤100个/ml，大肠菌群数≤6/L。
3游泳池水：细菌总数≤1000个/ml，大肠菌群数≤100/L。
【注意事项】
●采集水样应注意无菌操作，以防杂菌混入，取样容器应常规灭菌。
●水样应在采集后2小时内低温保存送检，若盛于密闭无菌容器内送检，可延至6小时。
●检验水样时应摇匀后取样，对严重污染水应稀释1∶1000甚至1∶10000。
●选择菌落数在30～300个/平板较易准确计数，对小至针尖大小的菌落应予以注意，切勿漏
计。
【问题】
①报告自来水、食品饮料细菌总数和大肠菌群数的实验结果，并说明是否符合卫生饮用标准
。
②为什么取大肠菌群数作为水的卫生细菌学检测指标之一?
三人体体表和呼吸道的细菌学检验
【实验目的】
1了解人体体表和呼吸道的有菌环境，加强消毒、灭菌观念。
【实验原理】
医院内感染最重要的传播途径是经工作人员手的间接接触。医院工作人员不可避免地既要接
触脏的地方(如伤口的敷料)，又要接触灭菌的部位(如手术伤口，导管等)。同时在大多数情
况下，手是人体中能直接接触的唯一部位。用手接触、污染和传播细菌量相当大。纵观医院
获得性感染的历史，手的消毒措施业已证明是控制医院内感染最重要的方法之一。
【实验内容与方法】
一手指皮肤的细菌学检查
1取一块普通营养琼脂平板或血平板，用未经消毒的手指在培养基表面轻轻地来回移动
，盖上皿盖。
2另取一块普通营养琼脂平板，用2%碘酒棉球消毒该手指，或用肥皂洗手干燥后，同样在
培养基表面轻轻来回划线，盖上皿盖。
3作好标记，将平板置于37℃培养24小时，观察结果。
二呼吸道的细菌检查
1取血琼脂平板(为什么要用血琼脂平板?)一块，打开皿盖，将培养基放于口腔前约10cm处
。
2受试者用力咳嗽数次，约30秒，然后盖上皿盖。
3将平板置于37℃温箱培养24小时，观察结果。
【问题】
①为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌?
②怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌?
(龙北国赵卫张文炳)
