药物分析实验讲义

(供药学本科用)

皖南医学院药学系

二00六年十二月六日

绪  论

实验目的

药品是用于诊断、预防、治疗疾病，增强体质的一种特殊商品，药品质量好坏直接关系到用药的安全、有效，关系到人的健康与生命安全。因此，为了确保用药的安全、合理、有效，必须从药品的研制、生产、供应和使用等过程全面控制药品质量。

《药物分析》是一门综合性应用学科，其实践性很强。《药物分析实验》是运用各种科学方法、分析技术，研究和检验各种药物(天然药物、化学合成药物、抗生素、生化药物等)及其制剂质量的实践性课程，是《药物分析》课程教学的重要组成部分。其内容主要是各种分析方法在药物分析中的实际应用，此外，还包括药品质量标准的制订以及分析方法评价等。

《药物分析实验》课程旨在培养学生的实际动手能力、书面表达能力以及科学思维能力，培养学生严肃认真、实事求是的科学态度，培养学生独立开展药物分析工作的能力。通过《药物分析实验》课程的教学，要求学生认真验证理论课讲授的相关药物分析理论，加深对药物分析学科基本理论和专业知识的认识与理解，熟悉《中国药典》常用的分析方法和实验技术的基本原理，正确掌握各种分析方法的操作技术，熟悉常用分析仪器的正确使用方法，为从事药品质量研究与检验、新药研究开发、临床药物分析等工作奠定坚实的基础。

实验要求

扎实的基本操作技能是进行药品质量控制工作与科学研究的基本条件，学生应该珍惜实验课程的实际训练机会，实验过程中仔细、认真，勤动手，在整个药物分析实验课教学过程中，应该做到：

1.通过实验验证药物分析的基本理论，加深对专业知识的理解。

2.复习实验教材中各类代表性药物的分析方法，熟练掌握各种分析的操作技术。

3.培养独立开展药物分析的能力。

4.养成严肃认真的工作作风和实事求是的工作态度。

5.原始记录是实验报告的重要组成部分，养成尊重原始记录的科学态度。

具体到每一节实验课，参加实验课教学的学生必须做到：

一、课前做好预习工作

课前应复习理论课上讲解过的实验原理与操作要点，明确该次实验的目的与要求。

预先熟悉实验内容、步骤、方法，推导实验中涉及的计算公式。

尽量找出实验可能的误差来源及消除方法，预估实验中可能发生的问题及处理办法。

二、课中仔细认真操作

1.实验中一定要确保安全。使用水、火、煤气及易燃、易爆、有毒、腐蚀性试剂时应特别小心。时刻注意防火、防爆。保证实验室气流通畅。发现事故苗头(如闻到煤气味、发现电路线上有火花、异常的焦糊味等)或发生事故时及时报告，不懂时千万不要擅自处理。

2.开始实验操作后，要随身携带一本编有页码的实验记录本，实验过程中，应及时、准确、完整地记录原始数据、现象及操作。实验记录应忠于事实，如实地反应实验中的操作、现象、数据等，不得编造或篡改。实验记录不得用铅笔书写，可用钢笔或圆珠笔书写，要求字迹清楚。实验记录本绝对不准撕页。实验记录本绝对不得涂改，涂改的原始记录将视为无效，如实验记录有误，以能看清原来写错的记录为基础，可在写错处打上双横线，在旁边空白处写上正确记录。原始记录应直接记于实验记录本上，决不允许记在纸条上、称量纸上、滤纸上、手掌上，也不允许记在其他本子上再誊写，更不允许暂时记在脑子里等有空时一起记录。

3.实验中应仔细、认真，要严格按照实验规程操作，认真练习操作技术，细心观察实验现象，如实记录原始数据，出现问题时及时咨询代教教师。

4.爱护公物，节约使用，移物归位。小心使用仪器，损坏仪器应及时报损、登记，精密仪器用毕应登记签名。公用仪器、药品或试剂应在指定位置取用，不要拿回自己实验台处。残液应倒入指定的废液缸中，切勿直接倒入水槽。可回收利用的废溶剂应回收到指定容器中。

5.实验中注意避免试剂及药品的污染。取用时仔细观察标签，取出的试剂与药品不要再倒回原瓶，取用完毕应随手加盖，不要盖错瓶盖。若操作不当，发生试剂或药品污染，应按规定及时处理并立即报告老师。

6.实验课不得旷课，未经允许不得私下相互调课，实验期间不得擅自离开实验室；进行讲义指定内容以外的实验或重做实验须经老师批准。

三、课后及时清理台面，总结实验

1.实验完毕应立刻清理：电子仪器关闭，拔去电源插头，放于指定位置；玻璃仪器按要求洗净后放回原处；剩余试剂药品按规定处理，擦净实验台面，洗液盖好瓶盖收放妥当；抹布、刷子洗净置于原处，几凳橱柜整理归位。经老师同意后离开实验室。

2.值日生应负责整理公用试剂台面及公用试剂，处理废液缸中的废液，打扫地面卫生，清除垃圾，检查水、电、煤、门窗等安全事宜，经老师同意后离开实验室。

3.认真总结实验结果，得出相应结论，按指定格式填写实验报告并于规定时间上交。

实验室安全守则

在药物分析实验中，频繁使用水、电、煤气，经常使用腐蚀性、易燃、易爆或有毒的化学试剂，大量使用易损的玻璃仪器，常常使用电子仪器，有时还会使用高压气体钢瓶，为确保实验正常进行，保证实验人员的人身安全，在实验过程中，必须严格遵守以下实验室安全守则：

1.进入实验室，应着实验服、戴实验帽(长发者应将长发拢于实验帽内)，进行具有一定危险性的实验(如氧瓶燃烧实验)时，应穿戴防护衣物(如防护眼镜、防护面具、防护口罩、防护手套)。

2.严禁在实验室内饮食，吸烟；严禁将饮用水、食物带入实验室放置；严禁以实验用容器代替水杯、餐具使用；任何试剂、药品不能触及皮肤，固体药品应以药匙取用，不得用手抓取，任何试剂、药品不能直接闻味，不得入口尝试；实验完毕，必须洗净双手。

3.进入实验室后应尽快熟悉实验室环境，确定水、电、煤气的阀门位置、掌握其开关方法。水、电、煤气一经使用完毕，应立即关闭水龙头、煤气开关，拔掉电插头。遇到停水时应立即关闭水龙头，以防来水后跑水。冷凝装置使用完毕后，应及时关闭冷却水。使用电器设备时，应特别仔细，切不可用潮湿的手或导电物品碰触电闸、电器开关及其他带电仪器。已经确定漏电的电器绝对不得使用，以免触电。电器或导线着火时，首先应立刻切断电源，再行灭火，灭火可采用沙、二氧化碳灭火器或干粉灭火器，禁止使用水或泡沫灭火器等导电液体灭火。离开实验室时，应再次确认已关闭水、电、煤气的开关。

4.酒精灯应以火柴点燃，不得直接接火，以免酒精溢出引燃。点燃的火柴使用后立即熄灭。酒精灯使用完毕后，立刻用灯帽盖上，不得用口吹灭。用试管加热药品时，管口不准朝向任何人，以免药品喷出伤人。实验过程中万一发生火灾，不要惊慌，首先尽快切断电源或燃气源，再根据起火原因针对性灭火：①酒精及其他可溶于水的液体着火时，可用水灭火。②有机溶剂或油类着火时，绝对不能用水灭火，这反而会造成火势蔓延，应用沙土隔绝氧气扑灭火焰。③衣服着火时，切忌奔跑，应就地躺下滚动，同时用湿洗衣服在身上抽打灭火。如果发生烫伤，应在实验室简单处理后去医院医治。但严重者应立刻送医院治疗。

5.使用浓酸、浓碱及其他具有强烈腐蚀性的试剂时，应特别小心，切勿溅在皮肤或衣服上，眼睛更应注意保护。

6.一些有机溶剂(如乙醚、乙醇、丙酮、苯、三氯甲烷等)极易引燃，必须远离明火与热源(如电炉)。

7.使用玻璃仪器时应注意轻拿经放，以免破损造成伤害。

     实验一   巴比妥类药物的鉴别及含量测定

一、目的要求

1.掌握巴比妥类药物的化学结构与分析方法的关系，正确鉴别和区别该类中常用药物。

2.熟悉巴比妥类药物的紫外分光光度法的含量测定。

二、仪器及试药

（一)鉴别试验

1.试剂：碳酸钠，硝酸银，浓硫酸，亚硝酸钠，巴比妥，蒸馏水。

2.器材：玻棒，烧杯，量筒，标签纸，药物天平，称量瓶，称量纸，小钢勺。

（二)巴比妥及含硫巴比妥区别试验

1.试剂：硫酸铜，吡啶，巴比妥，蒸馏水。

2.器材：玻璃棒，烧杯，量筒，白口瓶，标签纸，药物天平，称量瓶，称量纸，小钢勺。

三、实验准备

1. 碳酸钠试液：取一水合碳酸钠12.5g或无水碳酸钠10.5g,加水使溶解成100ml,即得。

2.硝酸银试液：取硝酸银17.5g，加水适量使溶解成1000ml，摇匀。置玻璃塞的棕色瓶中，密闭保存。

3. 加吡啶溶液（1→10):取吡啶1ml，加水稀释至10ml，即得。

4. 铜吡啶试液：取硫酸铜4g，加水90ml溶解后，加吡啶30ml，即得。本液应临用新制。

5. 甲醛试液：可取用“甲醛溶液”。

6. 0.1mol/L氯化钾溶液：取7.45g氯化钾，加水1000ml,即得。

7. 氢氧化钠饱和溶液：取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。

8. 0.1mol/L氢氧化钠溶液:取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml。摇匀。

9. 硼酸－氯化钾缓www.med126.com冲液(pH9.0):取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化钾溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L氢氧化钠溶液210ml，即得。  

四、实验原理及方法

(一)鉴别

1．银盐反应

巴比妥类药物在适当的碱性溶液中，遇过量硝酸银试液，即产生白色的二银盐沉淀。

2．铜盐反应

因巴比妥药物分子中含有－CONHCONHCO－基团，可互变异构成烯醇型，与铜盐在碱性溶液中作用，产生类似双缩脲的颜色反应。与硫酸铜、吡啶的反应式如下：

反应后，巴比妥类药物显紫色或产生紫色沉淀。

 (二) 巴比妥的含量测定

实验原理：巴比妥类药物如巴比妥在酸性介质中几乎不电离，无明显的紫外吸收。但在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构，因而可采用紫外分光光度法测定其含量。

实验方法：取本品，精密称定，加pH9.4的磷酸盐缓冲溶液溶解并定量稀释制成每1ml 中含10μg的溶液。照分光光度法（附录Ⅳ A)，在240nm 的波长处测定吸收度，按巴比妥(C₈H₁₂N₂O₃)的吸收系数（ )为538计算，即得。

五、注意事项

1．注意选用适当仪器进行鉴别反应。

2．铜盐反应操作中注意防止过量碱的干扰，供试品溶液中每加硫酸铜试液1 滴后，马上观察产生沉淀的颜色变化过程并及时记录。

六、计算

巴比妥的百分含量：

式中，A为吸收度， 为百分吸收系数，l为溶液厚度。

七、思考题

1．常用哪些方法鉴别巴比妥类药物？

2．用紫外分光光度法分析巴比妥类药物时，定性、定量的依据是什么？定量时为什么在不同pH值溶液中测定其吸收度？

实验二   药品的杂质检查

一、目的要求

1.掌握一般杂质检查的目的和原理，熟悉杂质检查的操作方法。

2.了解某些药物中特殊杂质的检查意义，并掌握其操作方法。

二、仪器及试药

(一)葡萄糖中一般杂质的检查

（1)酸度及澄清度检查

1.试剂：酚酞，氢氧化钠，比色用氯化钴，比色用硫酸铜，比色用三氯化铁，蒸馏水。

2.器材：烧杯，药物天平，标签纸，称量瓶，比色管，称量纸，小钢勺。

（2)氯化物及硫酸盐的检查

1.试剂：硝酸，硝酸银，标准氯化钠，盐酸，氯化钡，标准硫酸钾，蒸馏水。

2.器材：烧杯，药物天平，玻棒，比色管，水浴锅，称量纸。

(二)乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查

1.试剂：乙酰水杨酸，95%乙醇，盐酸，硫酸铁铵，水杨酸标准品，冰醋酸，蒸馏水。

2.器材：容量瓶，比色管，分析天平，量筒，玻璃棒，烧杯，吸量管，胶头滴管。

三、实验准备

1.酚酞指示液：取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。

2.氢氧化钠液（0.02mol／L)：取氢氧化钠8.6g，加水使溶解成100ml，即得。  

3.标准比色液：精密量取比色用氯化钻液10ml，比色用三氯化铁液30ml 与比色用硫酸铜20ml，加水稀释成100ml

4.稀硝酸：取硝酸105ml，加水稀释至1000ml，即得。本液含HNO₃应为9.5％～10.5％。    

5.硝酸银试液：取硝酸银17.5g，加水适量使溶解成1000ml，摇匀。置玻璃塞的棕色玻璃瓶中，密闭保存。 

6.标准氯化钠溶液的制备:称取氯化钠0.165g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10μg的Cl)。 

7.稀盐酸：取盐酸234ml，加水稀释至1000ml，即得。本液含HCl应为9.5％～10.5％。

8.25％氯化钡溶液：取氯化钡的细粉25g，加水使溶解成100ml，即得。 

9.标准硫酸钾溶液：称取硫酸钾0.181g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于100μg的SO₄)。

10.新制的稀硫酸铁铵溶液：取1mol／L 盐酸液1ml 加硫酸铁铵2ml 后，再加水适量使成100ml。

11.水杨酸对照液：精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水使成1000ml，摇匀。

四、实验原理及方法

(一)葡萄糖中一般杂质的检查

1．溶液的澄清度与颜色：

取本品25g，加热水溶解后；放冷，用水稀释到50ml，溶液应澄清无色，如显色，与对照液（精密量取比色用氯化钻液10ml，比色用三氯化铁液30ml 与比色用硫酸铜20ml，加水稀释成100ml)2.0ml 加水稀释至50ml 比较，不得更深。

2．氯化物：

取本品0.6g，加水溶解使成25ml（如显碱性可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml。溶液如不澄清，滤过，置50ml 纳氏比色管中，加水使成约40ml,加硝酸银试液1ml，用水稀释成50ml 摇匀，在暗处放置5 分钟。如发生混浊，与标准氯化钠溶液一定量制成的对照液（取标准氯化钠溶液10μg／ml)6ml 置50ml 的纳氏比色管中，加稀硝酸10ml ，用水稀释成约40ml。加硝酸银试液1ml，再加水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5 分钟比较不得更浓（0.01%)。

3．硫酸盐：

取本品2g，加水溶解使成20ml（如显碱性，可滴加稀盐酸使成中牲)，溶液如不澄清滤过置50ml 纳氏比色管中，加水适量稀释使成25ml，再加稀盐酸1ml 置30～50 ℃水浴中保温10 分钟，加25％氯化钡溶液3ml,摇匀；放置10 分钟，如发生混浊，与标准硫酸钾溶液一定量制成的对照液（取标准硫酸钾溶液100ug／ml)2ml 置50ml 纳氏比色管中，加水稀释使成25ml，加稀盐酸lml，置30～50℃ 水浴中保温10 分钟，加25％氯化钡溶液3ml，摇匀，放置10 分钟比较，不得更浓（0.01％)。

(二)乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查

1.合成工艺及水杨酸的来源

(1)合成工艺：

（2)水杨酸的来源：由生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生。水杨酸对人体有毒性，而且分子中酚羟基在空气中被逐渐氧化成一系列醌型有色物质，如淡黄、红棕甚至深棕色，使阿司匹林成品变色。

2.检查原理：利用阿司匹林结构中无酚羟基，不能与高铁盐作用，而水杨酸则可与高铁盐反应生成紫堇色，与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，从而控制游离水杨酸的限量。

3.方法：取本品0.1g．加乙醇1ml 溶解后，加冷水适量使成50ml 立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1mol／L 盐酸液1ml 加硫酸铁铵2ml 后，再加水适量使成100ml)，摇匀，30 秒钟内。如显色与对照液（精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水使成1000ml，摇匀)精密量取lml，加乙醇1ml，水48ml 与上述新制的硫酸铁铵溶液1ml，摇匀比较。不得更深（0.1%)。

五、注意事项

1.纳氏比色管的选择与洗涤：

(1)比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须注意使样品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上刻度均匀，如有差别，不得相差2mm。

(2)比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁上划出条痕，影响比色或比浊。

2.平行原则：比色或比浊时，样品液与标准液的实验条件应尽可能一致，平行操作。

3.严格按操作步骤进行试验，注意各种试剂的加入顺序。如氯化物的检查时，加适量蒸馏水使成约40ml后，再加入AgNO₃试液。

4.比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀，主要是利用手腕转动360^。的旋转操作来完成。比色方法是将两管同置于白色背景上，从侧面观察。比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下观察。

六、计算

限量计算：

式中V_标准为标准液体积，C_标准为标准液浓度，W_样为样品取样量

七、思考题

1.本实验中检查的杂质属于哪种杂质？检查的目的是什么？

2.氯化物的检查中，为什么宜在硝酸酸性溶液中进行？

3.硫酸盐检查法适宜比浊浓度范围？供试品溶液为何加盐酸成酸性？

4.乙酰水杨酸中游离水杨酸检查的基本原理是什么？

5.根据本实验操作，计算葡萄糖中氯化物、硫酸盐的杂质限量规定及乙酰水杨酸中水杨酸的限量。

实验三 盐酸普鲁卡因注射液的鉴别、检查

一、目的要求

1、掌握盐酸普鲁卡因注射液的鉴别及检查方法。

2、了解盐酸普鲁卡因鉴别中的各种现象。

二、仪器及试药

1．试剂：盐酸普鲁卡因注射液，对氨基苯甲酸对照品，二次蒸馏水，红色石蕊试纸，10%氢氧化钠溶液，对二甲氨基苯甲醛溶液。

2．器材：电分析天平，锥形瓶，薄层板，薄层色谱展开缸，变色喷雾瓶。

三、实验准备：

1.10%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠10g，加水至100ml即得。

2.对氨基苯甲酸对照品：加乙醇制成每1ml 中含30μg 的溶液。

3.展开剂：苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14：1：1：4)

4.对二甲氨基苯甲醛溶液：2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成。

四、实验原理及方法

（一)盐酸普鲁卡因的鉴别：取本品约0.1g，加水2ml 溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml,即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，发生的蒸气能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。  

(二) 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查

精密量取本品，加乙醇稀释使成每1ml 中含盐酸普鲁卡因25mg 的溶液，作为供试品溶液。另取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml 中含30μg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层层析法（2005 版药典附录)试验，吸收上述两种溶液各lμl, 分别点于合有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H 薄层板上；用苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14：1：1：4)为展开剂，展开后取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成)喷雾显色，供试溶液如显与对照品相应的杂质斑点，与对照品溶液的主班点比较，不得更深（1.2%)。

五、注意事项

1.点样量不宜过多，否则会拖尾分离不好。

2.展开剂不要加得过多，起始线切勿浸入展开剂中。

3.展开槽与薄层板用展开剂蒸气预饱和，消除边缘效应。

六、计算

限量计算：

式中V_标准为标准液体积，C_标准为标准液浓度，W_样为样品取样量

七、思考题

1.解释盐酸普鲁卡因鉴别中产生各种现象的原因。

2.什么叫边缘效应？

实验四 水杨酸钠的含量测定（双相滴定法)

一、目的要求

掌握双相滴定法的基本原理操作。

二、仪器及试药

1．试剂：水杨酸钠，二次蒸馏水，乙醚，甲基橙指示剂，0.1mol/L盐酸；

2．器材：电分析天平，分液漏斗，具塞锥形瓶，酸碱滴定装置，石英二次水蒸馏器。

三、实验准备

1.甲基橙指示液：取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。

2.盐酸滴定液(0.1mol/L)：取盐酸9.0ml， 加水适量使成1000ml，摇匀。　　

3.盐酸滴定液(0.1mol/L)的标定：取在270～300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.15g，精密称定，加水50ml使溶解，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2分钟,冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1ml盐酸滴定液(0.1mol/L)相当于5.30mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。

4.甲基红－溴甲酚绿混合指示液:取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得。

四、实验原理及方法

(一)原理：本品为白色颗粒，粉未或结晶性粉末，在水中易溶。本实验采用在水-醚二相中，用标准酸液直接滴定。由于滴定过程中生成的游离酸不溶解于水而妨碍终点的观察指示剂的颜色变化。因此，将精密称量的样品置于分液漏斗中，加水溶解后，以甲基橙为指示剂，加入有机溶剂，例如乙醚等，边用盐酸标准溶液滴定，边强力振摇。这样，将滴定中产生的水杨酸不断地萃取入有机溶剂中，同时降低水杨酸的离解。为使滴定完全，最后将有机层分出用水洗涤，使可能混溶于有机层中的盐洗出，洗液并入水层，再加入有机溶剂，继续以盐酸标准液滴定至水层显持续的橙红色。

(二)方法：取本品约0.3g，精密称定，置分液漏斗（125ml)中，加水15ml，乙醚30ml与甲基橙指示液3 滴，用盐酸滴定液(0.1mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中，加乙醚20ml，继续用盐酸滴定液(0.1mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续的橙红色，即得。（每1ml的盐酸滴定液(0.1mol/L)相当于14.4mg的C₇H₅O₃Na)。

五、注意事项

1.减重法称量时，样品倾出后直接置于分液漏斗内。而漏斗口小，样品不易全部转移，可在漏斗口上置一小漏斗，使样品不受损失。

2.为了防止先加样品后加入水的操作步骤会使样品积聚在分液漏斗底部，而不易全部溶解，可以先加入少量水后，再称量样品。

3.滴定过程中，振摇要充分。

4.分液漏斗放置至水层与醚层分层后，再分取水层，注意将水层全部分出，以免造成损失。

5.本品使用大量乙醚，注意防灾等安全，实验完毕后，废液进行回收，切勿倒掉。

6.本次实验在分液漏斗中进行，事先应做好检查，操作小心，以防溶液漏出。

六、计算

本品为原料药，其含量测定计算公式为：

式中，F为所配制滴定液的浓度校正因数，T为滴定度，V为供试品消耗滴定液的毫升数， 为供试品的称量重量。

七、思考题

1．何谓双相滴定法？

2．双相滴定操作中，有哪些平行原则需要遵循？

3．双相滴定法适用于哪些药物的定量分析？

4．水杨酸钠的含量测定，采用盐酸标准溶液直接滴定时，有什么缺点？

实验五  乙酰水杨酸的两步滴定法

一、目的要求

1．掌握乙酰水杨酸两步滴定法测定含量的依据

2．掌握两步滴定法测定乙酰水杨酸含量的方法

二、仪器和试剂

（一)试剂：乙酰水杨酸、氢氧化钠、硫酸、酚酞指示剂、乙醇

（二)器材：普通天平、分析天平、锥形瓶、称量瓶、称量纸、玻璃棒、酸式滴定管、碱式滴定管。

三、实验准备

1．0.1mol/LNaOH滴定液的配制

2．0.05mol/LH₂SO₄标准溶液的配制

3．酚酞指示剂的配制

四、基本原理及方法

（一)基本原理

由于乙酰水杨酸在生产过程中，可能有水解，产生水杨酸和醋酸，另外本品剂中还加入枸橼酸和酒石酸作为稳定剂，为避免这些酸性物质的干扰采用两步滴定法。

第一步：用NaOH中和乙酰水杨酸、水杨酸、醋酸、枸橼酸、酒石酸。

第二步：用过量的NaOH使乙酰水杨酸盐水解为水杨酸钠和醋酸钠，然后用标准硫酸液滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。

（二)试验方法

取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性)20ml，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3 滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液(0.05mol/L) 滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml 氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg 的C₉H₈O₄。

五、注意事项

1．分析天平的正确使用

2．减重法称量的正确操作  

3．滴定管的正确操作

4．为了使乙酰水杨酸易于溶解，以及防止在水溶液中滴定时酯的水解，因而用中性乙醇为溶剂进行滴定。

5．第一步中和时，为了避免样品的水解，滴定时应注意温度在20℃以下，并在不断搅拌下（防止局部过大)较快的滴定。

六、含量计算公式

ASA的标示量%=

Vo：空白试验消耗硫酸滴定液体积（ml)；V：样品测定试验消耗硫酸滴定液体积(ml)；F：硫酸滴定液浓度校正因数；T：滴定度；W：供试品片粉取样量(g)； ：平均片重量（g)。

七、思考题

1．如何配制中性乙醇，为什么要用中性乙醇？

2．在中和过程中为何要迅速滴定并不断振摇？

实验六  双波长等吸收点法测定速洁舒洗剂中

醋酸氯己啶的含量

一、目的要求

1. 掌握双波长分光光度法的基本原理，复方制剂不经分离直接测定各组分含量的方法。

2. 熟悉单波长型分光光度计进行双波长法测定。

二、仪器及试药

替硝唑、醋酸氯己啶、紫外分光光度计

三、实验准备

速洁舒洗液：替硝唑(TN)0.2g，醋酸氯已啶(CA)0.2g蒸馏水加至1000ml,混匀，即得。

四、实验原理及方法

(一)实验原理：

(1)波长的选择：在待测组分（a)的最大吸收波长（测定波长，l1)处测定待测组分和干扰组分（b)吸收度的总和；另选一适当波长（参比波长，l2)测定吸收度，并使干扰组分在测定波长和参比波长处的吸收度相等，即  ，而待测组分在这两个波长处吸收度的差值足够大。

（2)定量依据  样品在二波长下吸收度差值（DA)：

即，吸收度差值（DA)仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。

（3)基本条件：① 干扰组分在两个波长处吸收度相等(ΔA=0)，以消除其干扰。

   ② 待测组分在两个波长的ΔA足够大，以满足定量分析的要求。

③ 波长λ1、λ2应选在吸收曲线的平缓处，以减小测定误差。

(4)速洁舒洗液的紫外光谱：分别配制10mg·L^-1的替硝唑，醋酸氯己啶溶液，以蒸馏水为空白进行紫外扫描，结果显示，醋酸氯己啶在波长253nm处有吸收峰，替硝唑在此有等吸收点，故可用双波长等吸收点法测定醋酸氯己啶的含量。

(二) 实验方法：

1.标准曲线的制作：

 精密称取醋酸氯己啶对照品适量(如：0.0192g)溶于100ml量瓶中并稀释至刻度，分别量取2.0，3.0，3.5，4.5，5.0，5.5ml于50ml量瓶中并稀释至刻度，分别在波长253nm、波长273nm处测定吸收度，求ΔA，并计算其回归方程。

2.样品的测定：精密量取本品2ml于50ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，按分光光度法于波长253nm，273nm处测吸光度。按回归方程计算含量。

五、注意事项

当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位时，波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故应注意测试条件的一致性。

六、计算

根据所求得的回归方程计算醋酸氯己啶的含量。

七、思考题

1、双波长等吸收点法的基本条件？

2、双波长等吸收点法定量的依据是什么？

实验七 硫酸阿托品注射液的含量测定(酸性染料比色法)

一、目的要求

掌握酸性染料比色法测定生物碱制剂的基本原理及操作。

二、试剂与器材

1．试剂：硫酸阿托品、溴甲酚绿、氯仿、蒸馏水。

2．器材：量筒、分析天平、容量瓶(25，50，100ml) 、2ml吸量管、紫外-可见分光光度计。

三、实验准备

1．对照品溶液的制备：精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5.0ml，置100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，即得（每1ml中含硫酸阿托品约50μg)。

2．供试品溶液的制备：精密量取本品适量（约相当于硫酸阿托品2.5mg)，置50ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得(每1ml中含硫酸阿托品约50μg)。

3．溴甲酚绿：取溴甲酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021mg，加0.2mol/L盐酸溶液1.6ml使溶解后，加水稀释成100ml，必要时过滤。

四、原理与方法

1．原理：在pH3.6 的缓冲液中，硫酸阿托品的阳离子（BH^＋)与溴甲酚绿的阴离子（In)定量结合成有色络全物（BH^＋In^－)，用氯仿提取，在波长420nm处测定吸收值，并与标准品按同法对比求得其含量。

2．方法：精密量取对照品溶液与供试液各2.0ml，分别置于预先加入10ml氯仿的25ml 分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2.0ml，振摇提取2分钟后，静置使分层(时间约1小时)，分取澄清氯仿层，移至1cm吸收池，以2ml水按同法操作所得的氯仿液为空白，在420nm的波长处分别测定吸收度，计算并将结果与1.027相乘(标示量为mg/ml，本品应为标示量的90.0～110.0%)。

五、准意事项

1．本实验所用分液漏斗必须干燥无水。

2．本实验所需标准溶液、试剂及溶剂等均应用吸量管精密量取。

3．标准品与供试品均应平行操作，振摇与放置时间应一致。

4．分取氯仿层测定时，初滤液应弃去（约1ml)。所取氯仿层必须澄清透明不得混有水珠。

六、计算

七、思考题

1．酸性染料比色法的操作要点有哪些？影响测定的主要因素有哪些？

2．本法在操作过程中为什么要严防水分混入有机溶剂中？

实验八  盐酸吗啉胍的非水碱量法

一、目的要求

1．通过学习盐酸吗啉胍的非水碱量法，掌握非水溶液滴定法的原理和操作。

2．掌握生物碱盐酸盐进行非水滴定时的计算公式。

二、试剂与器材

1．试剂：盐酸吗啉胍，冰醋酸，醋酸汞，结晶紫，高氯酸。

2．器材：分析天平，酸式滴定管，锥形瓶，量筒，胶头滴管。

三、实验准备

1．高氯酸滴定液的标定：取0.75g于105℃ ~110℃电烘箱中干燥至恒重的基准试剂邻苯二甲酸氢钾，置于干燥锥形瓶中，加入50mL乙酸，温热溶解，加入结晶紫指示剂（5g/L)，用配制好的高氯酸溶液滴定至溶液由紫色变为蓝色（微带紫色)。已知每lml高氯酸滴定液(0.1mol／L)相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾，求高氯酸滴定液的浓度。

2．醋酸汞试液：取醋酸汞5g，研细，加温热的冰醋酸使溶解成100ml，即得。

3．结晶紫指示液：取结晶紫0.5g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。

四、原理与方法

本品为吗啉胍的盐酸盐。按干燥品计算，含C₆H₁₃N₅O﹒HCl不得少于98.5%。

取本品约0.1g，精密称定，加冰醋酸20ml，微热溶解后，放冷，加醋酸汞试液5ml，结晶紫指示液1滴，用高氯酸液(0.1mol/L)滴定，近终点时，剧烈振摇至沉淀析出，再滴定至蓝绿色，并将滴定结果用空白实验校正，即得，每1ml的高氯酸液(0.1mol/L)相当于10.38mg的C₆H₁₃N₅O.HCl。

五、计算

  公式：吗啉胍标示量(%)=

V-滴定吗啉胍样品消耗高氯酸的体积(ml)；

V₀-空白实验消耗高氯酸的体积(ml)；

m-样品的质量(mg)。

六、注意事项

1．本实验应用10ml滴定管进行滴定，以消耗高氯酸8ml为宜，故需事先估算出最大称样量。

2．所用仪器、药品不应含水，水分的存在影响测定结果的准确度。因此，实验前应将所用仪器洗净并烘干；实验方法中，如以较大量的酸酐代替冰醋酸为溶剂时(易氧化的样品除外)可以提高终点的灵敏度。

3．滴定时，滴定速度不要太快，太快时，粘附在滴定管内壁上的溶液还未完全流下，终点的读数易产生误差。

4．高氯酸标准溶液应注意其稳定性。

由于所用的溶剂为冰醋酸，具有挥发性，而且膨胀系数也较大，所以温度和贮存条件都可影响标准液的浓度。若滴定样品与标定标准液时的温度有差别，则需重新标定或按下式将标准溶液的浓度加以校正。

如果上述两种温度(t₀与t₁)相差太大(超过10℃)或贮存时间太久超过30天，则必须在临用前重新标定。

七、思考题

1．加入醋酸汞的目的是什么？

2．非水碱量法的基本原理是什么？

3．非水滴定法的操作要点有哪些？

4．请阐明本实验中滴定度的由来。

实验九  盐酸吗啉胍片的紫外分光光度法

一、目的要求

1．掌握紫外分光光度法测定盐酸吗啉胍的方法和含量计算方法

2．学习紫外分光光度法的一般操作步骤。

3．掌握紫外分光光度法中工作方程的制备方法。

二、试剂与器材

1．试剂：盐酸吗啉胍标准品，盐酸吗啉胍片剂。

2．器材：紫外分光光度计，电子天平，容量瓶，吸量管。

三、原理与方法

1．工作方程的绘制

取盐酸吗啉胍标准品约0.1g，精密称定，置500ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。精密量取1、2、3、4、5、6、7、8ml分置8个100ml容量瓶中，用水稀释至刻度。以水为空白，在273nm波长处测定吸光度，以吸光度对浓度进行一元回归得工作方程。

2．样品的测定

取本品10片，精密称定，研细，取本品细粉适量(约相当于盐酸吗啉胍50mg)精密称定，置100ml容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度。滤过，弃初滤液(约20ml)，取续滤液1ml置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。以水为空白，在273nm波长处测定吸光度，代入工作方程计算含量。

四、计算

测定出样品吸光度值后，将其代入工作方程并计算出浓度C，然后按下式计算吗啉胍标示量％

C：为计算出的浓度(g/ml)  D：稀释倍数   W_样：为称取样品量（g)

V：为将W_样(g)样品溶解成的准确体积（ml)  S_标：为标示量（g/片)

n：为所取片个数   W_n：为n个片的总重量

五、思考题

片粉溶解后应过滤，实验操作过程中可否省略此步骤？为什么？

实验十  氨基比林的pH指示剂吸光度比值法

一、目的要求

1. 掌握pH指示剂吸光度比值法测定药物含量的基本原理。

2. 熟悉测定氨基比林的基本操作方法。

二、试剂与器材

1．试剂：氨基比林，盐酸标准液，溴酚兰，无水乙醇。

2．器材：紫外分光光度计，电子天平，烧杯，容量瓶，

三、实验准备

溴酚兰试液：取0.05g溴酚兰, 溶于乙醇, 用乙醇稀释至100ml。

四、原理与方法

原理：pH指示剂吸光度比值法是中和法与分光光度法相结合的一种差示定量法，本法不需测得滴定终点时标准溶液的体积，而是一次加入定量标准溶液和指示剂，在pH指示剂碱式色和酸式色最大吸收λ₁和λ₂处(λ₁<λ₂)测定吸光度，以简单的数字处理计算含量的一种快速分析方法。

在等当点附近，可在指示剂(溴酚兰)碱式色和酸式色最大吸收波长λ₁，λ₂处(λ₁<λ₂)测定吸光度A₁、A₂。求得吸光度比值r=A₁/(A₁+A₂)；随着溶液pH值的变化，溴酚兰在同一波长处的吸光度有很大变化，因此r也有很大变化。从溴酚兰指示剂r～pH关系曲线可见，在某一pH区域内r随着pH值的变化而发生急剧变化，曲线斜率最大，几乎成直线关系。因此，在等当点附近pH很小的变化即可引起r值较大变化。

氨基比林为吡唑酮类药物，其吡唑酮环上的C₄上的二甲氨基具弱碱性，在水溶液中虽可用标准酸液直接滴定，但突跃不明显，等当点时pH为2.7。利用pH指示剂吸光度比值法，可进行测定。测定选用溴酚兰为指示剂，其酸式色与碱式色吸收光谱有显著差异，前者最大吸收波长在437nm，后者最大吸收波长在519nm，在等当点附近即使X(V_等/V)很小的变化，也能引起r[即A₂/(A₁+A₂)]显著变化。因此可利用r～X之间的关系，可预先绘制一系列r～X工作曲线。当进行样品测定时，只需测出该样品在一定条件下的r值，再由r～X关系表中查出对应的X值即可按下式计算出样品的百分含量。

方法：取本品(干燥品)1.1475g·f～1.1710g·f (f为标准溶液的浓度系数)于小烧杯中精密称定，准确加入0.5mol/L盐酸标准溶液10ml，溶解后转移至50ml容量瓶中，加入溴酚兰试液(0.05%无水乙醇溶液)1ml，加水稀释至刻度，混匀，以此液作为供试液，用水作空白液，在437nm测得吸光度为A₁，在591nm测得吸光度为A₂，根据r= A₁/(A₁+A₂)求出吸光度比值r。再从r～X曲线中求X值。

T为滴定度：1ml盐酸液(0.5mol/L)相当于0.1156g氨基比林。

附：r～X关系表

五、注意事项

1．

六、计算

七、思考题

1．

实验十一　HPLC法测定双黄连口服液的含量

一、目的要求

1．掌握高效液相色谱法测定中药制剂有效成分的原理。

2．了解高效液相色谱法在药物分析中应用的一般方法。

二、试剂与器材

1．试剂：双黄连口服液，黄芩苷对照品，绿原酸对照品，连翘苷对照品，十八烷基硅烷键合硅胶，甲醇，冰醋酸。

2．器材：液相色谱仪，容量瓶。

三、原理与方法

黄芩 照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸（50:50:1)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml容量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含黄芩苷0.1mg)。

供试品溶液的制备：精密量取装量项下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每支含黄芩按黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于80mg。

金银花 照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸（20:80:1)为流动相；检测波长为324nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。

对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加水制成每1ml中含40mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品2ml，置50ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10-20μl，注入液相色谱仪，测定即得。

本品每1ml含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于0.60mg。

连翘：照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75)为流动相；检测波长为278nm，理论板数按连翘苷峰计算不低于6000。

对照品溶液的制备 取连翘苷对照品适量，精密称定，加50甲醇制品每1ml含60μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 精密量取本品1μl，置中性氧化铝柱（100-200目，6g，内径1cm)上，用70％乙醇40ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加50％甲醇适量，温热使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1ml含连翘以连翘苷(C₂₉H₃₆O₂₅)计，不得少于0.30mg。

四、计算

  每支含黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁) =

   m_s-黄芩苷标准品的质量；

   A_i-样品中黄芩苷的峰面积；

   A_s-黄芩苷标准品的峰面积；

   V-双黄连的装量。

每1ml含绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)=

   C_s-绿原酸标准品的浓度；

   A_i-样品中绿原酸的峰面积；

   A_s-绿原酸标准品的峰面积；

   V_s-绿原酸标准品的进样量；

V_i-供试品的进样量。

每1ml含连翘以连翘苷(C₂₉H₃₆O₂₅)：计算(略)

五、注意事项

1．

六、思考题

实验十二　葡萄糖注射液的旋光分析法

[C₆H₁₂O₆·H₂O＝198.17]

一、目的要求

1．掌握旋光法测定葡萄糖含量的基本原理和方法。

2．学会正确使用旋光仪。

二、基本原理

本品是葡萄糖的灭菌水溶液。葡萄糖的分子结构中五个碳（C*)都是手性碳原子，具有旋光性。当直线偏振光通过该具有光学活性的化合物溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转。此种旋转在一定条件下，有一定的度数，称为旋光度。旋光度（α)与溶液的浓度（c)和偏振光透过溶液的厚度（l)成正比。当偏振光透过厚1dm并每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时，在一定波长与温度下测定的旋光度称为比旋度[α]^t_D，即[α]^t_D＝α／lc。式中，D为钠光谱的D线（589.3nm)，t为测定时的温度。葡萄糖的比旋度[α]^t_D＝＋52.75度。所以测定待测葡萄糖液旋光度即可求得其含量。

三、实验方法

   精密称取本品适量（约与葡萄糖10g相当)，置100ml 量瓶中，加氨试液0.2ml[10%或10%（g/ml)以下规格的本品可直接取样测定]，用水稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，得供试液。取出旋光计的测定管，用供试液冲洗数次，缓缓注入供试液适量（注意勿使发生气泡)，加盖密封后，置于旋光计内，缓缓旋转检偏镜检视，至视野中均匀明亮，读取刻度盘上表示的度数，即得供试液的旋光度，使偏光向右旋转者（顺时针方向)为左旋，以“－”符号表示，用同法读取旋光度三次，取其平均数按同法测定蒸馏水的读数为空白，测得的旋光度（α)与1.0426相乘，即得100ml供试液中含有的C₆H₁₂O₆·H₂O的重量(g)。

药典规定含葡萄糖(C₆H₁₂O₆·H₂O)应为标示量的95.0~105.0%。

四、操作要点及注意事项

1．配制供试液后，要静置10分钟，以达到平衡后才能测定。10％和5％的葡萄糖注射液无需稀释，可以直接取样测定。

2．供试液测定时的温度必须调节至25℃，否则影响比旋度，致使测定结果不准确。

3．测定管两端的圆玻片，为光学玻璃片，测定前应小以用软纸擦拭，以防磨损。

4．测定管洗净后，应用供试液体荡洗数次，以确保浓度的一致。

5．供试液体应缓缓加入，不能有气泡，否则应重新加入。加了液体后，两头密封时勿忘加垫橡皮圈，以免泄漏。

6．测定时先调整焦距，俟视野最清楚时，缓慢旋转检偏镜，前后多试几次，直至视中均匀明亮。以同法读取三次读数取其平均值。

7．测定完毕，测定管必须立即洗涤，以避免两头衬垫的橡皮圈因接触溶剂而发粘。用绸布或擦镜纸拭净镜面的灰尘、油污，以保持清洁，避免沾污，最后用布套将光学系统罩上。

8．钠光灯有一定使用寿命，连续使用时间不宜超过2 小时。

二、数据处理

据  

式中[α]²⁵_D为c=1g/ml、l=1dm时的旋光度（α)

所以  100ml供试液中无水葡萄糖的克数为

即100ml供试液中含水葡萄糖的克数为

五、实验后思考

该旋光法能否适用于葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的分析？为什么？

实验十三　差示分光光度法测定苯巴比妥片的含量　

（设计性实验)

一、实验的目的与要求：

　　掌握差示分光光度法消除干扰的原理和含量测定的方法

　　熟悉差示分光光度法测定波长选择的几种方法

二、实验设计性要点：

1．根据巴比妥类药物的紫外吸收光谱，设定对照溶液和待测溶液的浓度。

2．在3种不同pH值的溶液中苯巴比妥的浓度必须相等。

3．根据原光谱图有4种组合可供选择，比较各种组合下的差示光谱图。选择其中一种较好的组合进行苯巴比妥片的含量测定。

4．根据选定的差示光谱图，选择测定波长。

5．对照法测定含量。

三、主要实验仪器设备：

　　紫外分光光度计（扫描型、3台)

　　托盘天平（感量0.1g、10架)，分析天平（万分之一、5台)

四、相关主要实验材料和备品：

1．滴定台（30个)，万能夹（60个)，容量瓶（50ml、250个)，移液管（1ml、2ml、5ml、10ml各60支)，烧杯（50 ml、100 ml各60个)，研钵（30个)，玻璃棒（60根)，三角漏斗（60个)，定量滤纸（Φ10 cm、200张)。

2．苯巴比妥对照品（100g)，苯巴比妥片（规格15mg或30mg或100mg、1000片)

3． 氢氧化钠（500g)，氯化铵（500g)。（均为分析纯)

4．甲醇（14, 000 ml)，浓硫酸（1, 000 ml)，氨水（500 ml)（均为分析纯)

5．蒸馏水（20 L)

五、实验内容与步骤：

1　溶液配制

1.1　对照液配制　精密称取苯巴比妥对照品适量，加甲醇溶解并稀释成适当浓度，作为贮备液。精密吸取一定体积的贮备液3份，分别用0.05 mol/L H₂SO₄溶液、铵－氯化铵缓冲液（pH 10)，0.1 mol/L NaOH溶液稀释至50 ml，作为对照液1、2、3。

1.2　测定液配制　取苯巴比妥片20片，精密称定，研细，精密称取适量，加甲醇溶解并稀释至50 ml，过滤，弃去初滤液，精密吸取一定体积的续滤液3份，分别用0.05 mol/L H₂SO₄溶液、铵－氯化铵缓冲液（pH 10)，0.1 mol/L NaOH溶液稀释至50 ml，作为测定液1、2、3。

2　光谱测定

2.1　原光谱扫描　取对照液1、2、3，分别以各自的溶液为空白，于200 nm－400 nm　扫描，测定吸收光谱。

2.2　差示光谱扫描　根据原光谱图形（参见教材)，选择其中两种溶液，扫描它们的差示光谱，根据差示光谱图确定测定波长。

2.3　样品测定　分别以相应的溶液为空白，在选定的波长下测定选定的两种对照液的吸光度，并计算吸光度差值，记为△A_对。另取两种与对照液相同pH值的样品测定液，同法测定计算吸光度差值，记为△A_样。用标准品对照法计算样品溶液的浓度，并计算苯巴比妥片相当于标示量的百分含量。

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实验十四　氢溴酸东莨菪碱及其片剂的质量分析(综合性实验)

一、实验的目的与要求：

1.了解生物碱的鉴别、检查的方法与原理

2.掌握氢溴酸东莨菪碱片剂的质量分析的方法与原理

二、实验综合性要点：

多个环节、多种手段、多种方法和技术实施药品质量的全面控制。

从药物的外观性状、药品的理化常数、药品的真伪鉴别、药物的一般杂质和特殊杂质检查、药物的含量测定对药物的质量进行分析。

对小剂量片剂进行含量均匀度检查，确保用药的安全和有效。

应用旋光仪、酸度计、红外光谱仪、纸色谱法各种仪器方法。

三、主要实验仪器设备：

1.定量毛细管（100支)，温度计（分浸型250℃、30支)，电热套（30套)

2.纸色谱法展开室、点样器（30套)、

3.水浴锅（10个)、滤纸（10张)

4. 旋光仪及相应附件（自动、3台)

5. 酸度计（雷磁pH-3C型、3台)，复合电极（3支)

6. 红外光谱仪（中红外、2台)

7. 干燥箱（电热温度可调型、3台)

8. 紫外分光光度计（扫描型、3台)

9. 托盘天平（感量0.1g、10个)，分析天平（万分之一、5台)

10. 高速离心机（3台)

四、相关主要实验材料和备品：

1．分液漏斗（60ml、90个)，滴定管（酸式、10ml、30个)，试管（硬质玻璃、10ml、150个)，移液管（1ml、2ml、5ml、10ml各60支)烧杯（50 ml、100 ml各60个)，离心管（具塞、5ml、30支)，研钵（30个)

2．氢溴酸东莨菪碱(对照品500mg)，氢溴酸东莨菪碱（原料药500g)、氢溴酸东莨菪碱片(规格0.3g/片、2000片)

3．蒸馏水（20L)、氯仿（2000ml)，乙醇（1000ml)，硝酸(1000ml),氨水(500ml), 乙醚硅油或液状石蜡(5000ml) , 高氯酸(1000ml), 冰醋酸(5000ml), 正丁醇(5000ml)，乙醚（500 ml)，盐酸（500ml)。

4．高锰酸钾（500g)，醋酸汞（500g),结晶紫(50g)，碘化铋钾（100g)无水磷酸氢二钠(500g)，无水磷酸二氢钾（500g),溴甲酚绿(100g), 邻苯二甲酸氢钾(500g), 二氯化汞(100g)， 氢氧化钾（500g),硝酸银(100g)。注：以上化学试剂均为分析纯

五、实验内容与步骤：（详见中国药典(二部)2005年版)

1　氢溴酸东莨菪碱原料的分析

1.1　性状

1.1.1　熔点测定

1.1.2　比旋度测定

1.2　鉴别试验

1.2.1　沉淀反应

1.2.2　红外光谱对照

1.2.3　溴化物反应

1.3　检查

1.3.1　溶液的澄清度检查

1.3.2　酸度检查

1.3.3　其他生物碱的检查

1.3.4　易氧化物的检查

1.3.5　干燥失重的检查

1.4　含量测定（非水滴定法)

2　氢溴酸东莨菪碱片的分析

2.1　性状

2.2　鉴别（纸色谱法、托烷生物碱的鉴别反应、溴化物鉴别反应)

2.3　含量均匀度检查

2.4　含量测定（分光光度法)